MicroRNA-375过表达对小鼠实验性变应性鼻炎TSLP的影响

发布时间：2020-05-31 13:33

【摘要】：目的:建立变应性鼻炎的小鼠模型,并于其激发阶段给予miRNA-375慢病毒过表达载体干预,从基因和蛋白角度检测模型小鼠鼻黏膜中胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的差异性表达,探讨miR-375过表达对变应性鼻炎中TSLP的影响及可能的调控机制。方法:采用卵清蛋白刺激小鼠来建立变应性鼻炎的模型,并利用生理盐水作为参照,在诱导小鼠变应性鼻炎的基础上构建miR-375过表达慢病毒载体和对照载体并进行尾静脉注射干预。干预结束后分离出小鼠鼻腔的鼻黏膜组织,分别提取总RNA与总蛋白,利用实时荧光定量PCR法以管家基因β-actin为内参基因检测各组小鼠鼻黏膜中TSLP的mRNA相对表达;Western印迹法以GAPDH为内参蛋白检测各组小鼠鼻黏膜中TSLP的蛋白相对表达。结果:用OVA致敏的变应性鼻炎小鼠都出现程度不同的打喷嚏、挠前鼻以及流清涕等症状,组织学病理发现鼻黏膜结构破坏、炎症细胞浸润明显,miR-375过表达载体慢病毒干预后前述症状和发现有所减轻。实时荧光定量PCR检测小鼠鼻黏膜显示miR-375慢病毒过表达组中TSLP的mRNA相对表达水平要明显低于变应性鼻炎组和对照载体组(P0.05),差异有统计学意义。miR-375慢病毒过表达组、载体对照组和变应性鼻炎组TSLP的mRNA相对表达都要高于以生理盐水作为对照的组(P0.05),差异也具有统计学意义。Western印迹法检测显示变应性鼻炎组小鼠鼻黏膜中TSLP蛋白的表达明显高于生理盐水对照组(P0.05),miR-375慢病毒过表达载体干预后明显降低(P0.05),但miR-375慢病毒对照载体组相对变应性鼻炎组也出现了TSLP蛋白的表达下调(P0.05),差异有统计学意义。结论:本研究探究了miRNA-375与TSLP的相关性,实验表明在变应性鼻炎中,小鼠鼻腔鼻黏膜过表达的miR-375基因对TSLP的表达有负性调节作用,可能参与调节以Th2主导的免疫反应,为以TSLP为靶向的过敏性鼻炎干预方面提供证据与实验参考。
【图文】：

小鼠,中度,鼻腔,度量化

为观察与症状评分：鼻腔末次激发后 30。挠鼻 1-4 次为轻度，4 次以上为中度，，4 到 10 次为中度，10 次以上为重度过了前鼻孔是中度，涕流满面则为重度量化的方式评判上面三个指标，总分大本采集与处理：末次鼻腔激发后第二天醉后用眼科剪开胸暴露心脏行左心室肤皮毛，继续沿颅骨中线分离上翻暴组织置于 RNA 保存液-20℃保存或新鲜0%EDTA 溶液脱钙，继续石蜡包埋，冠状图 1.2.1 小鼠尾静脉注射

喷嚏,小鼠,慢病毒,变应性鼻炎

2 结果.1 小鼠生物学行为观察与评分末次激发后半个小时内观察：变应性鼻炎组小鼠（AR+）不间断挠鼻，喷数较多，流涕超过前鼻孔；慢病毒载体对照组小鼠（AR+mir control）也有断挠鼻，喷嚏次数多，但流涕多数都局限在前鼻孔；miR-375 慢病毒过表达鼠（AR+mir375）挠鼻与喷嚏次数较上述两组明显减少，部分小鼠有流涕，在前鼻孔；生理盐水对照组(AR-)偶有挠鼻与喷嚏，流涕也比较少见。三个叠加量化评分结果为：生理盐水对照组 2.10±0.47，，变应性鼻炎组 7.86±1.04iR-375 慢病毒过表达组 4.96±0.77，慢病毒载体对照组 6.54±0..38。变应性鼻平均得分超过 5 分，生理盐水对照组低于 5 分，说明造模成功；慢病毒载照组评分与变应性鼻炎组接近，但 miR-375 慢病毒过表达组较上述两组显降（P＜0.05）。
【学位授予单位】：海南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R765.21

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