TGF-β1对人巩膜成纤维细胞Smurf2和COL1A1影响的研究

发布时间：2020-06-21 03:07

【摘要】：目的TGF-β1/Smad信号通路是巩膜重塑的重要信号通路之一,Smurf2(Smad ubiquitination regulatory factor)是TGF-β1/Smad信号通路中的枢纽蛋白。本研究探讨Smurf2在人胚胎眼巩膜成纤维细胞(Human fetal scleral fibroblasts,HFSFs细胞)中表达,及TGF-β1作用下HFSFs细胞中Smurf2和效应蛋白COL1A1含量的变化,以期阐明TGF-β1对HFSFs细胞Smurf2通路的作用。方法HFSFs细胞复苏并稳定传代后,用免疫细胞化学法检测细胞中Smurf2蛋白的表达;分别用不同浓度TGF-β1(0ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml)处理HFSF细胞24h以及10ng/ml TGF-β1处理HFSFs细胞不同时长(1h、6h、12h、24h)后,用实时荧光定量法检测各组Smurf2 mRNA和COL1A1 mRNA表达水平;用蛋白免疫印迹(Western-Blot)法检测各组Smurf蛋白2和COL1A1蛋白的表达水平。结果1.Smurf2在HFSFs细胞的表达:免疫细胞化学检测的结果显示HFSFs细胞中有Smurf2蛋白的表达;2.不同浓度TGF-β1干预对HFSFs细胞Smurf2和CoL1A1表达的影响:5 ng/ml、10 ng/mlTGF-β1干预组Smurf2 mRNA表达上调(P=0.002、0.028)。1ng/ml和5 ng/mlTGF-β1干预组Smurf2蛋白表达上调(P=0.011、0.037)。其中,10 ng/ml TGF-β1干预组COL1A1 mRNA和蛋白表达显著升高(P0.01)。3.不同时长TGF-β1干预HFSFs细胞Smurf2和CoL1A1表达的影响:10 ng/ml TGF-β1共培养HFSFs细胞1h、6h、12h、24h后,COL1A1 mRNA 24h干预组表达显著升高(P=0.033);COL1A1蛋白表达改变呈先增加后降低趋势,6h组COL1A1蛋白表达显著升高(P=0.003),12h表达呈下降趋势(P=0.121),24h组表达有所回升(P=0.017)。Smurf2 mRNA和蛋白表达改变呈先增加后降低趋势,6h组Smurf2 mRNA和蛋白的表达升到最高(P=0.024、0.044);而在24h下降至与未刺激无显著差异(P=0.750,0.05)。结论1.Smurf2蛋白在HFSFs细胞中有表达。2.10ng/mlTGF-β1干预早期促进Smurf2mRNA和蛋白的表达,可有效诱导HFSFs细胞I型胶原的合成。3.Smurf2蛋白可能参与调控HFSFs细胞中TGF-β1/Smad信号通路的调控。
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R778.11
【图文】：

图 1.1. HFSFs 细胞空白对照组 图 1.2. HFSFs 细胞 Smurf2 抗体组图 1.3.ARPE-19 细胞空白对照组 图 1.4.ARPE-19 细胞 Smurf2 抗体组2.不同浓度 TGF-β1 干预对 HFSFs 细胞 COL1A1 表达的影响（1）实时荧光定量PCR检测结果：不同浓度TGF-β1（0 ng/ml、1 ng/ml、5 ng/m10 ng/ml）处理 HFSFs 细胞 24h 后：COL1A1 mRNA 的相对表达量分别为 1±0.02

图 1.1. HFSFs 细胞空白对照组 图 1.2. HFSFs 细胞 Smurf2 抗体组图 1.3.ARPE-19 细胞空白对照组 图 1.4.ARPE-19 细胞 Smurf2 抗体组2.不同浓度 TGF-β1 干预对 HFSFs 细胞 COL1A1 表达的影响（1）实时荧光定量PCR检测结果：不同浓度TGF-β1（0 ng/ml、1 ng/ml、5 ng/m10 ng/ml）处理 HFSFs 细胞 24h 后：COL1A1 mRNA 的相对表达量分别为 1±0.02

【参考文献】

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5 蔡瑜;徐奕;沈锡中;;Smad泛素化调节因子2在肝纤维化过程中对结缔组织生长因子的作用研究[J];内科理论与实践;2012年04期

6 阳韬;陆小劅;陈永平;王晓东;林躅;;SHP和Smurf2在大鼠肝纤维化中的动态表达及意义[J];医学研究杂志;2011年12期

7 张志;李孝建;梁达荣;李叶扬;;Smad泛素化调节因子-2及其mRNA在增生性瘢痕组织中的表达[J];中华损伤与修复杂志(电子版);2009年05期

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本文编号：2723406