水杨酸钠的SGN毒性研究：NMDA受体活动对GABAa受体电流的影响

发布时间：2020-07-03 20:40

【摘要】：目的:观察在水杨酸钠(sodium salicylate,SS)作用下,大鼠螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons,SGN)上NMDA受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR)活动对GABAa受体(γ-aminobutyric acid a receptor,GABAaR)电流的影响,进一步完善水杨酸钠耳毒性的受体机制。方法:急性分离培养新生SD大鼠SGN,采用全细胞膜片钳记录模式,观察在不同浓度水杨酸钠作用下,分别激活或抑制NMDAR对GABAaR电流的影响。结果:(1)SGN形态特点:SGN呈圆形或椭圆形,个体较大,表面光滑、胞膜完整、折光性强,细胞周围光晕明显,胞质均匀,核仁较大。6小时后逐渐贴壁,7小时左右贴壁完成,24小时后,SGN胞体长出神经突起,其长度达胞体的三倍以上,并可交织成网,7天以后,SGN开始萎缩、凋亡,细胞裂解并释放出胞质;(2)SGN鉴定:若急性分离培养的细胞可记录到一个快速激活、快速失活的内向电流,该电流可被0.3μM TTX迅速阻断,经洗脱后该内向电流可基本恢复,证实该电流为TTX敏感性电压门控性钠离子通道电流,该细胞为SGN;(3)生理状态及0.5mM SS和5mM SS分别作用下,0.5mM(以下相同)NMDA均未引出明显的NMDAR电流;(4)0.5mM SS和5mM SS分别作用下,0.5mM(以下相同)GABA引出的电流密度均值分别减少28.47%(n=5,F=67.020,P=0.0000.05)、55.77%(n=6,F=67.020,P=0.0000.05);(5)NMDA+GABA、0.2mM(以下相同)APV+GABA与GABA比较,引出的电流密度均值分别减小11.12%(n=5,F=1.626,P=0.0980.05)、6.64%(n=5,F=1.626,P=0.3060.05);(6)0.5mM SS+GABA+NMDA与0.5mM SS+GABA比较,电流密度均值减小27.72%(n=5,F=11.779,P=0.0210.05),0.5mM SS+GABA+APV与0.5mM SS+GABA比较,电流密度均值增加22.30%(n=5,F=11.779,P=0.0480.05);(7)5mM SS+GABA+NMDA与5mM SS+GABA比较,电流密度均值减小23.09%(n=8,F=162.313,P=0.0070.05),5mM SS+GABA+APV与5mM SS+GABA比较,电流密度均值增加115.08%(n=5,F=162.313,P=0.0000.05)。结论:⑴水杨酸钠可逆性抑制GABAaR的电流,且呈浓度依赖性;(2)生理状态下,NMDAR对GABAaR电流无显著影响,即不含水杨酸钠时,NMDAR可轻度抑制GABAaR电流,但差异无统计学意义;(3)水杨酸钠浓度依赖性地介导NMDAR抑制GABAaR电流,即越高浓度的水杨酸钠作用下,NMDAR对GABAaR电流的抑制作用越强。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R764
【图文】：

用于 SGN 培养；⑸ 用显微镊将含 SGN 的组织松散，置于含有 0.25%的胰蛋白酶-EDTA消化液中，置入 37℃、5% CO2的恒温培养箱中孵育；⑹ 隔 3-5min 取出离心管，轻弹其管壁数次，10min 后，用含 10%胎牛血清的细胞培养液终止消化；⑺ 置入低温离心机中以 1000rpm 的转速离心 5min，弃上清，加入 2ml培养液重悬，轻柔吹打 8-10 次；⑻ 将上述重悬的细胞悬液接种于预先用多聚赖氨酸包被的 35mm 培养皿中，置入 37℃、5% CO2 的恒温培养箱中培养；⑼ 培养 7-12 小时后，SGN 已基本贴壁，倒置相差显微镜下选取大而圆、胞膜周围折光性好、表面光滑的 SGN 行全细胞膜片钳记录。注：以上所有手术器械均经高压灭菌消毒后使用。

-2拉制仪Fig.2-2-2pullinginstrument

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 王仁俊;曾庆华;;GABAA受体失敏的研究进展[J];白城师范学院学报;2007年03期

2 马琳;余建强;徐婷婷;李玉香;;氧化槐果碱的镇痛作用及其对小鼠中枢GABAA受体的作用[J];临床医药文献电子杂志;2016年19期

3 刘红亮;戴体俊;;脑源性神经营养因子对大鼠海马神经元GABAA受体效应的影响[J];中国临床药理学与治疗学;2011年02期

4 邹宇;孔维佳;;单侧迷路破坏术后GABAA受体β_2亚型在前庭内侧核中的变化[J];武汉大学学报(医学版);2007年04期

5 王晓彤;林海雄;杜秀婷;刘敏;马博;张徐雯;张韧;;桂皮醛对肾阳虚大鼠GABAa受体mRNA表达的影响[J];时珍国医国药;2016年02期

6 张庭元;郑小敏;赵承军;秦毅;张晓光;杨文娟;马会明;孙苗;王燕蓉;;大鼠海马齿状回、杏仁核突触外GABAA受体表达与生殖周期雌孕激素变化相关性研究[J];宁夏医科大学学报;2012年08期

7 戚月凤;汤继宏;李岩;顾琴;;GABAA受体γ2亚单位在海人酸颞叶癫痫大鼠海马内的表达[J];神经损伤与功能重建;2015年02期

8 邹宇;孔维佳;刘波;;前庭代偿过程中GABAA受体α1亚型在前庭内侧核中的变化[J];听力学及言语疾病杂志;2008年02期

9 娄超;王桂芝;于剑锋;迟文英;贾旺华;张春燕;孙万秋;;中脑导水管周围灰质腹外侧区GABAA_(α3)及GABAB受体在调节急性疼痛中的作用[J];临床麻醉学杂志;2017年05期

10 黑悦;刘卫平;魏礼洲;伊西才;陈晓燕;;骨髓间充质干细胞对癫痫模型认知及海马区GABAA受体表达的影响[J];中华神经外科疾病研究杂志;2016年04期

相关会议论文 前10条

1 李振;赵忠新;余宏宇;;偏侧帕金森大鼠基底神经节亚区氨基酸递质、GABA能神经元及GABAA受体亚单位mRNA表达变化的研究[A];第九次全国神经病学学术大会论文汇编[C];2006年

2 游秋云;王平;孔明望;田代志;吴丽丽;;酸枣仁汤对老年失眠证候模型大鼠脑组织Glu、GABA及GABAA受体表达的影响[A];科技引领产业、支撑跨越发展——第六届湖北科技论坛论文集萃[C];2011年

3 喻志源;王伟;;大鼠皮层和海马区GABAA受体亚单位年龄相关的表达变化[A];中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会论文摘要汇编[C];2005年

4 吕雅;耿武军;王均炉;;磷酸化对酒精撤退引起的大鼠海马神经元GABAA受体功能与表达变化的调节[A];中国中西医结合麻醉学会[CSIA]年会暨第二届全国中西医结合麻醉学术研讨会、江苏省中西医结合学会麻醉专业委员会成立大会论文汇编[C];2015年

5 王倩;李金容;赵小林;朱永香;闫剑群;;激活杏仁中央核GABAA受体对大鼠钠欲表达的影响[A];2008年神经内分泌暨神经免疫内分泌学术研讨会论文摘要汇编[C];2008年

6 张庭元;王燕蓉;郑小敏;;大鼠海马突触外GABAA受体表达水平与生殖周期雌孕激素变化相关性研究[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年

7 雷町;刑亚洲;陈兢;张恒;方媛;高安亮;;颞叶内侧型癫痫大鼠模型海马GABAA受体亚单位α1、β3、γ2表达研究[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年

8 张辉;徐满英;;GABA及GABAA受体拮抗剂Bic对束旁核痛反应神经元电活动的影响[A];Proceedings of the 7th Biennial Meeting and the 5th Congress of the Chinese Society for Neuroscience[C];2007年

9 焦东亮;刘瑶;赵敏;刘景根;;背侧纹状体GABAA受体GABAAα1参与ATS成瘾的机制研究[A];中华医学会第十三次全国精神医学学术会议论文汇编[C];2015年

10 王智慧;刘苏雨;樊登贵;王青云;;失神癫痫发作中GABAA受体在皮质-丘脑环路中的动力学调控机制[A];第十届动力学与控制学术会议摘要集[C];2016年

相关博士学位论文 前1条

1 李果;GABAa受体配位体的设计合成和活性评价[D];中国协和医科大学;2004年

相关硕士学位论文 前10条

1 黄喜;水杨酸钠的SGN毒性研究：NMDA受体活动对GABAa受体电流的影响[D];广西医科大学;2018年

2 陈慧英;水杨酸钠的SGN毒性研究：多巴胺受体影响NMDA受体与GABAa受体的表达[D];广西医科大学;2016年

3 蔡正;水杨酸钠对大鼠耳蜗螺旋神经节神经元GABAa受体的可逆性抑制作用[D];广西医科大学;2015年

4 张庭元;雌鼠不同生殖周期特定脑区突触外GABAA受体表达研究[D];宁夏医科大学;2012年

5 杨光;鞘内注射氧化槐定碱的镇痛作用及对中枢GABAA受体的影响[D];宁夏医科大学;2011年

6 刘s

本文编号：2740148