外泌体运载的TRPP2 siRNA抑制咽鳞癌细胞的上皮—间质转变

发布时间：2020-07-12 18:38

【摘要】：背景近年来放疗、化疗、免疫治疗以及外科手术已广泛应用于头颈癌的临床治疗中,但由于癌细胞容易转移,头颈部恶性肿瘤的治疗效果仍不理想。其中,上皮-间质转变是肿瘤细胞转移过程中的重要一环。TRPP2(瞬时电位通道)信号通路已经被证明可以通过调节喉鳞状细胞癌的EMT(上皮-间质转变)过程来增强癌细胞的侵袭与迁移。这一发现为肿瘤的临床治疗提供了新的思路。目的探讨外泌体/TRPP2 siRNA复合物是否可以通过抑制TRPP2表达来影响FaDu(人咽鳞癌细胞)细胞的上皮-间质转变过程。方法1.外泌体与TRPP2 siRNA结合使用外泌体提取液和高速离心的方法提取人胚肾293细胞(HEK-293)外泌体,用琼脂凝胶电泳法检测TRPP2 siRNA与外泌体是否稳定结合。2.观察外泌体/TRPP2 siRNA复合物在FaDu细胞中的分布使用荧光显微镜观察被荧光染料标记的外泌体及TRPP2 siRNA,以确定外泌体/TRPP2 siRNA复合物是否被FaDu细胞摄取。3.检测TRPP2、vimentin、N-cadherin和E-cadherin蛋白在被外泌体/TRPP2siRNA复合物转染后的FaDu细胞中的表达使用Western blotting的方法检测TRPP2,vimentin,N-cadherin和E-cadherin蛋白的表达水平,以确定转染后的FaDu细胞的TPRR2通道及EMT过程是否受到影响。结果1.外泌体能与TPRR2 siRNA稳定结合。2.外泌体/TRPP2 siRNA复合物能被FaDu细胞大量摄取。3.外泌体/TRPP2 siRNA复合物能使转染的FaDu细胞EMT过程减弱。结论外泌体/TRPP2 siRNA复合物可以被FaDu细胞摄取并显著影响其TRPP2表达和EMT过程,外泌体/TRPP2 siRNA复合物有望成为头颈肿瘤治疗的新的方向。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.63
【图文】：

复合物,核酸酶,琼脂凝胶电泳,小鼠血清

组为无外泌体包裹的 TRPP2 siRNA,孵育后行琼脂凝胶电泳，结果显示D）不含外泌体的 TRPP2 siRNA 在 5 分钟内即被核酸酶及小鼠血清中其解，但外泌体/TRPP2 siRNA 复合物显示的条带强度并在 120 分钟内并此可以证明外泌体可以包裹 TRPP2 siRNA 使其免于核酸酶的降解，增siRNA 在体内的稳定性。

分部,复合物,喉鳞癌

213.5 外泌体/TRPP2 siRNA 复合物提高了 FaDu 细胞中 TRPP2 蛋白的表达TRPP2 是由 PKD2 基因编码的非选择性阳离子通道，在许多细胞过程中起着重要作用。我们以前的研究表明 TRPP2 表达水平在人喉鳞细胞癌中显着增加，并且可通过抑制 TRPP2 影响喉鳞癌细胞 EMT 过程。在本研究中，我们发现外泌体在体图 2. 外泌体/TRPP2 siRNA 复合物在 FaDu 细胞内的分部

复合物,细胞,转染,特异性基因

外将 TRPP2 siRNA 递送到 FaDu 细胞中，但 TRPP2 siRNA 是否实现 TRPP2 特异性基因沉默是未知的。因此，我们接下来使用蛋白质印迹分析来评估转染后 FaDu 细胞中 TRPP2 的表达水平，以证明外泌体运载的 TRPP2 siRNA 是否发挥了作用。如（图3，A，B）显示，转染外泌体/TRPP2 siRNA 复合物的 FaDu 细胞，TRPP2 蛋白的表达水平远低于无外泌体包裹的 TRPP2 siRNA 转染的对照组。因此，我们的发现不仅表明外泌体成功地将完整的 TRPP2 siRNA 递送至 FaDu 细胞，而且还表明了 TRPP2siRNA 显著抑制 FaDu 细胞中的 TRPP2 表达。

【参考文献】