氢气水对大鼠碱烧伤角膜新生血管抑制作用及机制研究
发布时间：2020-08-03 09:04
【摘要】：目的:研究氢气水滴眼对碱烧伤诱导的大鼠角膜新生血管的抑制作用,通过检测在氢气水干预条件下角膜及房水组织中肿瘤坏死因子α和色素上皮衍生因子PEDF的变化,探讨角膜病理性血管形成的相关机制。方法:1.选取SPF级,6-8周龄,体重(180±20)g雄性SD大鼠,均将右眼作为实验眼。2.制作碱烧伤诱导的角膜新生血管模型,成功建立48眼,将其按随机化原则进行分组,分为阴性对照组、阳性对照组和治疗组。3.阴性对照组给予生理盐水滴眼,阳性对照组给予妥布霉素地塞米松眼液滴眼,治疗组给予1.6PPM(part per million)氢气水滴眼。均为每次一滴,每日四次,持续14天。4.在模型建立后,采用裂隙灯显微镜分别观察第1天、第3天、第7天和第14天的角膜基本情况,拍照后使用Digimizer Image Analysis软件测量并记录新生血管长度,计算新生血管生长面积。5.在碱烧伤后第14天,水合氯醛腹腔麻醉,在无菌条件下取大鼠角膜组织并抽取房水。6.苏木精-伊红染色技术观察角膜组织病理学变化;7.免疫组织化学染色技术检测角膜组织色素上皮衍生因子PEDF蛋白表达。8.实时荧光定量PCR技术检测角膜组织色素上皮衍生因子PEDF m RNA含量。9.酶联免疫吸附测定技术检测房水内肿瘤坏死因子TNF-α蛋白含量。结果:1.碱烧伤后第3、7天和14天,阴性对照组新生血管面积分别为(9.49±2.79)mm2、(17.71±4.06)mm2和(25.35±1.40)mm2;阳性对照组新生血管面积分别为(4.27±2.68)mm2、(6.44±4.67)mm2和(15.98±4.75)mm2;治疗组新生血管面积分别为(3.26±1.82)mm2、(8.59±3.98)mm2和(3.24±2.34)mm2;在第3、7和14天,治疗组和阳性对照组血管面积均小于阴性对照组,差异均有显著统计学意义(均为P0.01);碱烧伤第3天,虽然治疗组新生血管面积小于阳性对照组,但相差不大,差异无统计学意义(P0.05);碱烧伤第7天,虽然治疗组血管面积大于阳性对照组,但相差仍然较小,差异无统计学意义(P0.05);在碱烧伤后第14天,治疗组血管面积明显小于阳性对照组,差异具有显著统计学意义(P0.01)。2.碱烧伤第14天,HE常规染色及免疫组织化学染色结果提示:治疗组角膜组织中PEDF蛋白表达较阳性对照组和阴性对照组明显增强,基质层新生血管极少;3.碱烧伤第14天,实时荧光定量PCR结果提示:治疗组角膜组织中PEDF m RNA含量明显高于阳性对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(均为P0.01);4.碱烧伤第14天,酶联免疫吸附测定结果提示:治疗组房水中TNF-α蛋白含量明显低于阳性对照组与阴性对照组,差异均有显著统计学意义(均为P0.01)。结论:采用1.6 PPM氢气水滴眼,能够通过调控肿瘤坏死因子TNF-α,上调色素上皮衍生因子PEDF在眼内的表达,继而有效抑制碱烧伤诱导的大鼠角膜新生血管。
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R779.1
【图文】：
生血管芽生长，角膜呈灰白色浑浊，上皮部分融解缺损，基质层水肿均可见皱褶，前房可见浮游物，但未见明显积血，瞳孔视不清。碱烧伤后第 3 天，各组可见新生血管已出芽，并由周边角膜缘向角阴性对照组中，可见血管生长致密，长而粗，较整齐，呈毛刷状，相互暗红，但未达角膜中央，累及面积达到 1/2，角膜基质层水肿明显，部分阳性对照组与治疗组仅在血管床周围发现局灶性血管芽，短而细，分布对照组中，有部分角膜上皮中央区出现大面积溶解脱落（图 1）。碱烧伤后第 7 天，在阴性对照组中，毛细血管生长达到高峰期，密集交织成网，角膜上皮缺失部分已基本愈合；阳性对照组与治疗组血管生较细；治疗组角膜上皮已逐渐透明；阳性对照组中角膜中央区仍可见溶碱烧伤后第 14 天，在阴性对照组中，毛细血管呈圆周生长，已蔓粗大致密，全角膜呈瓷白色浑浊；阳性对照组可见血管床附近小血管有熟血管仍继续向角膜中央生长，累及面积达 1/2 以上，角膜中央区变薄疗组中，血管床附近细小血管已基本退化，成熟血管短而细，分布稀疏渐透明（图 3）。
图 2 大鼠角膜碱烧伤第 7 天 CNV 照片。A 阴性对照组 B 阳性对照组 C 治疗组A B C图 3 大鼠角膜碱烧伤第 14 天 CNV 照片。A 阴性对照组 B 阳性对照组 C 治疗组3.2 角膜新生血管面积计算结果碱烧伤后第 3、7 天和 14 天，阴性对照组新生血管面积分别为（9.4（17.71±4.06）mm2和（25.35±1.40）mm2；阳性对照组新生血管面积2.68）mm2、（6.44±4.67）mm2和（15.98±4.75）mm2；治疗组新生血管面±1.82）mm2、（8.59±3.98）mm2和（3.24±2.34）mm2（表 1）。
图 3 大鼠角膜碱烧伤第 14 天 CNV 照片。A 阴性对照组 B 阳性对照组 C 治疗组3.2 角膜新生血管面积计算结果碱烧伤后第 3、7 天和 14 天，阴性对照组新生血管面积分别为（9（17.71±4.06）mm2和（25.35±1.40）mm2；阳性对照组新生血管面积2.68）mm2、（6.44±4.67）mm2和（15.98±4.75）mm2；治疗组新生血管面±1.82）mm2、（8.59±3.98）mm2和（3.24±2.34）mm2（表 1）。表 1 大鼠 角膜碱烧伤诱导不同时间点 3 组 CNV 面积（x分组 3d 7d 阴性对照组9.49±2.79 17.71±4.06 25.3阳性对照组4.27±2.68* 6.44±4.67* 15.9治疗组3.26±1.82* 8.59±3.98* 3.2注：与阴性对照组相比，*P＜0.01；与阳性对照组相比，△P＜0.01
本文编号：2779409
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R779.1
【图文】：
生血管芽生长，角膜呈灰白色浑浊，上皮部分融解缺损，基质层水肿均可见皱褶，前房可见浮游物，但未见明显积血，瞳孔视不清。碱烧伤后第 3 天，各组可见新生血管已出芽，并由周边角膜缘向角阴性对照组中，可见血管生长致密，长而粗，较整齐，呈毛刷状，相互暗红，但未达角膜中央，累及面积达到 1/2，角膜基质层水肿明显，部分阳性对照组与治疗组仅在血管床周围发现局灶性血管芽，短而细，分布对照组中，有部分角膜上皮中央区出现大面积溶解脱落（图 1）。碱烧伤后第 7 天，在阴性对照组中，毛细血管生长达到高峰期，密集交织成网，角膜上皮缺失部分已基本愈合；阳性对照组与治疗组血管生较细；治疗组角膜上皮已逐渐透明；阳性对照组中角膜中央区仍可见溶碱烧伤后第 14 天，在阴性对照组中，毛细血管呈圆周生长，已蔓粗大致密，全角膜呈瓷白色浑浊；阳性对照组可见血管床附近小血管有熟血管仍继续向角膜中央生长，累及面积达 1/2 以上，角膜中央区变薄疗组中，血管床附近细小血管已基本退化，成熟血管短而细，分布稀疏渐透明（图 3）。
图 2 大鼠角膜碱烧伤第 7 天 CNV 照片。A 阴性对照组 B 阳性对照组 C 治疗组A B C图 3 大鼠角膜碱烧伤第 14 天 CNV 照片。A 阴性对照组 B 阳性对照组 C 治疗组3.2 角膜新生血管面积计算结果碱烧伤后第 3、7 天和 14 天，阴性对照组新生血管面积分别为（9.4（17.71±4.06）mm2和（25.35±1.40）mm2；阳性对照组新生血管面积2.68）mm2、（6.44±4.67）mm2和（15.98±4.75）mm2；治疗组新生血管面±1.82）mm2、（8.59±3.98）mm2和（3.24±2.34）mm2（表 1）。
图 3 大鼠角膜碱烧伤第 14 天 CNV 照片。A 阴性对照组 B 阳性对照组 C 治疗组3.2 角膜新生血管面积计算结果碱烧伤后第 3、7 天和 14 天，阴性对照组新生血管面积分别为（9（17.71±4.06）mm2和（25.35±1.40）mm2；阳性对照组新生血管面积2.68）mm2、（6.44±4.67）mm2和（15.98±4.75）mm2；治疗组新生血管面±1.82）mm2、（8.59±3.98）mm2和（3.24±2.34）mm2（表 1）。表 1 大鼠 角膜碱烧伤诱导不同时间点 3 组 CNV 面积（x分组 3d 7d 阴性对照组9.49±2.79 17.71±4.06 25.3阳性对照组4.27±2.68* 6.44±4.67* 15.9治疗组3.26±1.82* 8.59±3.98* 3.2注：与阴性对照组相比，*P＜0.01；与阳性对照组相比，△P＜0.01
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 齐林嵩;张作明;张磊;;氢气眼科医学研究进展[J];中华实验眼科杂志;2014年11期
相关博士学位论文 前1条
1 孙强;氢气生物学效应系列研究[D];第二军医大学;2011年
本文编号：2779409
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/yank/2779409.html
最近更新
教材专著
