CCNE1在鼻咽癌中的表达、功能及分子机制的初步研究

发布时间：2020-08-15 22:24

【摘要】：背景:鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma,NPC)是一种主要发生在东南亚、中国南部的一种恶性程度非常高的肿瘤。鼻咽癌的发生可能与遗传(基因易感性)、EB病毒感染、环境因素、饮食习惯以及各种促癌因素有关。大部分病人被诊断时都产生了局部浸润或者远处早期转移等晚期表现,所以鼻咽癌患者的生存率不高。因此,研究与鼻咽癌发生、发展、预后的有关分子机制是非常重要的,这可以促进鼻咽癌的诊断、预测以及采取准确的治疗手段。细胞周期调节蛋白E1(Cyclin E1)表达于细胞周期的G1-S期,它通过结合以及激活CDK2(cyclin-dependent kinase 2)来调节哺乳动物细胞的分裂。CCNE1-CDK2这一复合物的磷酸化在诱导DNA复制的同步性、中心体的复制和调控、染色体的重构以及组蛋白的合成中起了非常重要的作用。CCNE1的高表达与多种恶性肿瘤比如乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、子宫内膜癌及结肠癌患者的不良临床预后紧密相关。其在不同肿瘤中发挥不同的作用,如在乳腺癌中CCNE1可导致耐药的发生,在胃癌中促进EMT(Epithelial-Mesenchymal Transition)的发生,在食管癌中促进细胞增殖,而CCNE1在鼻咽癌中的作用有待我们去研究。目的:1.分析CCNE1在鼻咽癌组织中的表达及对鼻咽癌患者临床参数的影响;2.体内外功能实验研究CCNE1在鼻咽癌中的作用;3.探究CCNE1在鼻咽癌中发挥作用的机制。方法:1.分析CCNE1在鼻咽癌组织中的表达及及对鼻咽癌患者临床参数的影响(1)免疫组化观察CCNE1在鼻咽癌组织表达定位和表达量差异;(2)分析CCNE1对预后的影响;(2)分析CCNE1对鼻咽癌患者其它临床参数的影响。2.体内外功能实验研究CCNE1在鼻咽癌中的作用(1)在HONE1和SUNE1中构建稳定敲除CCNE1的细胞株;(2)体外实验验证CCNE1对细胞增殖、侵袭和迁移的影响;(3)裸鼠皮下成瘤;(4)构建稳定过表达CCNE1的细胞株进行功能回复实验。3.探究CCNE1在鼻咽癌中发挥作用的机制:Western Blot检测增殖和EMT相关蛋白表达改变并找到相关通路。结果:1.在鼻咽癌组织中,CCNE1呈核高表达且CCNE1核高表达的患者预后最差;2.CCNE1在体内外均促进鼻咽癌细胞增殖、侵袭迁移;3.CCNE1激活PI3K/AKT通路及下游周期、EMT相关因子。结论:CCNE1在鼻咽癌中发挥一个潜在的促癌基因的作用,它通过使PI3K/AKT通路激活,从而促进鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移。
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.63
【图文】：

鼻咽,统计学意义,与非

３５例非癌鼻咽黏膜组织中，８例ＣＣＮＥ１呈核高表达，２７例ＣＣＮＥ１呈逡逑核低表达。经统计，与非癌鼻咽黏膜组织相比，ＣＣＮＥ１核表达在鼻咽癌组织逡逑中相对高表达，差异具有统计学意义（Ｐ＝0．00６）（图１－１，表１－１）。逡逑１５逡逑

序列,干扰情况,鼻咽癌,癌细胞

为选择干扰效果最佳的ｓ＿Ａ序列，本研究设计了邋３组干扰序列。通过慢逡逑病毒分别转染鼻咽癌细胞后通过实时荧光定量ＰＣＲ方法对其干扰效果进行了逡逑检测。ｓｈ－ＣＣＮＥｌ－１转染组ＣＣＮＥｌｍＲＮＡ下调最为明显，（图２－１，表２－１）。逡逑因此选用敲低效果最佳的ｓｈ－ＣＣＮＥｌ－１建立ＣＣＮＥ１稳定沉默细胞株，并进行后逡逑续生物学行为等检测。逡逑１．５＂］逦ＨＯＮＥＩ逦１５－｜逦ＳＵＮＥ１逡逑Ｃ逦Ｇ逦Ｔ逡逑Ｕ－邋ｍ邋１．0－逦ｔｕ邋汔邋１．０．逡逑Ｉ逦！邋Ｉ逦１邋＆邋Ｉ逡逑ＩＩ逦°－５－邋Ｉ邋＊邋４邋Ｉ邋＾邋°－５－邋１邋＊邋±邋＊逡逑０．０逦■逦１逦逦１逦邋０．０逦逦１逦逦１逦逡逑，Ｗ邋／逦／／逡逑次逦岑逦岑逦＾逦＾逦旁逡逑图２－１邋Ｑ－ＰＣＲ检测鼻咽癌癌细胞中ＣＣＮＥ１的干扰情况逡逑Ｆｉｇ．２－１邋Ａｎａｌｙｓｉｓ邋ｏｆ邋ＣＣＮＥ１邋ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ邋ｉｎＮＰＣ邋ｃｅｌｌ邋ｌｉｎｅｓ邋ｂｙ邋Ｑ－ＰＣＲ．逡逑４１逡逑

干扰情况,鼻咽癌细胞

图２－２邋Ｑ－ＰＣＲ检测鼻咽癌细胞中ＣＣＮＥ１的干扰情况逡逑Ｆｉｇ．２－２邋Ａｎａｌｙｓｉｓ邋ｏｆ邋ＣＣＮＥ１邋ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ邋ｉｎ邋ＮＰＣ邋ｃｅｌｌ邋ｌｉｎｅｓ邋ｂｙ邋Ｑ－ＰＣＲ．逡逑

【参考文献】