HSP90靶向治疗后发性白内障的抑制研究

发布时间：2020-09-11 09:13

　　背景后发性白内障(Posterior capsular opacification,PCO)是白内障晶体囊外摘除术后最常见的并发症,是术后视力再次障碍的主要原因。PCO主要病理特征是残留晶状体上皮细胞发生增殖、迁移、上皮-间质转化、胶原沉积及晶状体纤维再生等。目前,手术方式的提高及人工晶体材料和设计的改进可以改善术后PCO的发生,但PCO的发生率并没有大幅度降低。现阶段治疗PCO唯一有效手段是Nd:YAG激光治疗,这种方法不仅治疗费用昂贵,且术后导致多种并发症,如晶体损伤、视网膜脱落、囊状黄斑水肿、眼内炎、角膜水肿、眼压升高、晶状体脱位或半脱位、晶状体凹陷等。目前,并没有治疗或预防PCO的药物安全应用于临床试验。我们研究发现热休克蛋白90(Heat shock protein 90,HSP90)特异性抑制剂17AAG能够抑制晶状体上皮细胞系增殖。HSP90是一种ATP依赖性分子伴侣,在蛋白稳定和降解中起着重要作用,抑制HSP90功能导致其靶蛋白降解。17AAG是HSP90 N端抑制剂,能抑制HSP90和ATP的结合,从而抑制HSP90 ATP酶的活性,现处于临床II期研究。EGFR是HSP90的靶向蛋白,EGFR信号通路受HSP90调控,17AAG能通过促进EGFR降解抑制其下游通路从而抑制细胞增殖。晶状体上皮细胞系是研究PCO最简单的实验模型,但未考虑细胞粘附在晶状体囊膜上的影响,未能真实反映PCO病理生理上的变化。因此,我们制备体外大鼠PCO囊袋模型和体内兔PCO模型,以探讨HSP90特异性抑制剂17AAG对后发性白内障的抑制作用及分子机制。目的探讨HSP90特异性抑制剂17AAG对后发性白内障的抑制作用及分子机制。方法1.制备体外大鼠晶状体PCO囊袋模型,通过免疫印迹实验检测无血清培养6h、12h、24h时和正常组织上皮细胞中HSP90、EGFR、p-ERK的表达量。2.使用小鼠晶状体上皮细胞系(m LEC)和人晶状体上皮细胞系(SRA01/04、HLE-B3),通过细胞增殖实验检测17AAG对晶状体上皮细胞增殖的影响。3.制备大鼠PCO囊袋模型,通过培养和倒置显微镜观察,检测17AAG对囊袋残留上皮细胞增殖的影响,并通过Ed U标记法验证其作用效果。4.制备大鼠PCO囊袋模型,通过免疫印迹实验检测17AAG对囊袋残留上皮细胞中EGFR及下游通路表达的影响。5.制备大鼠PCO囊袋模型,通过TUNEL染色法和免疫印迹实验检测17AAG是否诱导囊袋上皮细胞凋亡。6.制备大鼠PCO囊袋模型,通过培养和倒置显微镜观察,比较17AAG和HSP90非N端抑制剂PEITC对囊袋残留上皮细胞增殖的影响,并通过Ed U标记法验证其作用效果。7.构建兔体内PCO模型,检测17AAG对兔体内PCO发生的影响。结果1.大鼠晶状体囊袋残留上皮细胞高表达HSP90,EGFR信号通路激活。2.17AAG抑制晶状体上皮细胞系增殖,且有时间和浓度依赖性。3.17AAG抑制大鼠PCO囊袋模型组织上残留上皮细胞增殖。4.17AAG促进囊袋残留上皮细胞中EGFR降解并抑制其下游通路。5.17AAG诱导大鼠晶状体PCO囊袋上皮细胞发生凋亡。6.HSP90非N端抑制剂PEITC不抑制大鼠晶状体囊袋残留上皮细胞增殖。7.17AAG延迟兔体内PCO的发生。结论1.PCO发生中HSP90表达升高,EGFR信号通路上调,并参与囊袋残留上皮细胞增生。2.17AAG通过抑制HSP90-EGFR信号通路抑制大鼠囊袋残留上皮细胞增殖和兔PCO发生。3.HSP90是预防PCO的一个新的靶向分子。
【学位单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R776.1
【部分图文】：

上皮细胞,大鼠,分子伴侣,晶体囊

晶体囊袋残留的晶状体上皮细等覆盖晶体后囊膜所造成的[4]。首先在镜下，分离出大鼠晶状体，经过在前囊培养囊袋组织。我们选取正常晶状体囊袋模型组织，通过免疫印迹检测发现，1）。另外，我们发现HSP90的靶向蛋白达量也明显升高。赖性的热休克蛋白，具有分子伴侣功能作为肿瘤防治研究中的一个重要的药制HSP90分子伴侣的功能，且作为抗肿特异性抑制剂17AAG对PCO的影响。

晶状体上皮细胞

由于细胞的增殖能力和生存能力较强，采用细胞系研究是一种普遍和简单的方式，因此，我们首先使用细胞系模型通过细胞增殖实验检测17AAG对晶状体上皮细胞增殖的影响。实验结果表明，0μM 、0.1μM 、0.2μM、0.4μM和0.8μM的17AAG分别处理鼠晶状体上皮细胞（mLEC）24h、48h和72h，随着加药浓度的升高，细胞增殖明显受到抑制，呈明显的剂量-效应关系（图A、B、C）。通过SPSS进行概率回归分析，17AAG处理24h、48h和72h对于mLEC的半数抑制浓度IC50分别为0.849μM（p=0.001<0.150）、0.489μM（p=0.09<0.150）、0.491μM（p=0.001<0.150）。根据此实验结果，我们选取0.4μM浓度17AAG分别处理mLEC、SRA01/04和HLE-B3三种细胞0h、24h、48h和72h，随着加药时间升高，细胞增殖明显受到抑制，呈明显时间-效应关系（图D、E、F）。因此，17AAG能抑制鼠晶状体上皮细胞（mLEC）和人晶状体上皮细胞（SRA01/04和HLE-B3）增殖，并且随着17AAG加药浓度升高或加药时间增加，细胞增殖抑制率明显增加。

大鼠,囊袋,标尺,放大图

20图 2.3.1.1 不同浓度 17AAG 对大鼠晶状体囊袋残留上皮细胞增殖的影响。（A、E、H 和 K）为不同浓度 17AAG 处理囊袋第一天。（B、F、I、L）为不同浓度 17AAG 处理囊袋第二天。（C、G、J、M）为不同浓度 17AAG 处理囊袋第三天。图 A、B、C 为 0μM 17AAG 处理，图 E、F、G 为 0.2μM17AAG 处理，图 H、I、J 为 0.4μM 17AAG 处理，图 K、J、M 为 0.8μM 17AAG 处理。其中 A-C 和E-M 标尺为 500μm ，D 图为 C 图中黑框的放大图，标尺为 200μm。图中黑色小箭头指的是细胞边缘。

【相似文献】