miR-19b抑制物对鼻咽癌细胞STAT3信号通路及其恶性生物学行为的影响

发布时间：2020-10-13 05:10

　　 鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)主要是以我国南方地区为区域特性的鼻咽粘膜恶性肿瘤,鼻咽癌患者早期诊断困难,易发生转移,确诊时已有近70%左右的患者发生转移,鼻咽癌易转移及侵袭性强是治疗失败的主要原因。所以阐明鼻咽癌远处转移的分子机制,将为鼻咽癌的治疗开启新的篇章。STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)信号通路活化是鼻咽癌发生发展的关键分子通路,其持续活化促进鼻咽癌细胞的增殖及存活。活化的STAT3形成同源二聚体,转位进入细胞核后发挥其促癌转录因子的功能,传递细胞增殖和侵袭的信号启动下游效应基因的表达,包括G1/S-特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)、B细胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2)、髓样细胞白血病蛋白1(Mcl-1)等因子,这些因子促进细胞增殖、存活、抑制肿瘤细胞的凋亡。同时,STAT3也受一些内源性抑制因子的调控,SOCS1是STAT3的内源性抑制因子,使JAK激酶的活性受到抑制,进一步使STAT3信号通路的活化受到抑制。mi RNA是基因表达调控系统的重要一员,通过转录后调控靶基因的表达。有研究发现鼻咽癌细胞与组织中mi R-19b的表达上调。SOCS1为mi R-19b靶基因之一,故推测mi R-19b抑制物可能解除mi R-19b对SOCS1的靶向抑制,从而抑制STAT3信号通路活化,进而抑制鼻咽癌细胞的恶性生物学行为。目的:明确mi R-19b抑制物解除mi R-19b对SOCS1的靶向抑制,从而抑制STAT3活化,进而抑制鼻咽癌细胞的恶性生物学行为。方法:1.CCK-8检测mi R-19b抑制物对鼻咽癌C666-1细胞增殖的影响;2.流式细胞术检测mi R-19b抑制物对鼻咽癌C666-1细胞凋亡的影响;3.Tanswell迁移实验检测mi R-19b抑制物对鼻咽癌C666-1细胞迁移的影响;4.WB检测mi R-19b抑制物对鼻咽癌C666-1细胞中STAT3信号通路相关蛋白表达的影响。结果:1.mi R-19b抑制物抑制鼻咽癌细胞C666-1的增殖。2.mi R-19b抑制物促进鼻咽癌细胞C666-1的凋亡。3.mi R-19b抑制物抑制C666-1细胞的迁移。4.mi R-19b抑制物干预鼻咽癌细胞C666-1细胞后,促进了SOCS1的表达,抑制了STAT3的磷酸化,从而抑制鼻咽癌相关STAT3信号通路的活化,同时该通路的下游效应因子Cyclin D1、Mcl-1和Bcl-2的表达下调。结论:mi R-19b抑制物可能靶向STAT3信号通路抑制鼻咽细胞的恶性生物学行为,并为鼻咽癌的治疗提供新的分子靶标。
【学位单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R739.63
【部分图文】：

28 1 不同浓度的 miR-19b 抑制物复合物的转染效率. 0 μM 转染效率为零，15转染效率较高, 且无明显差异Different rate of miRNA-19b inhibitor in transfected efficiency. 0 μM transfectedro, 15 μM and 40 μM transfected efficiency were high, and there was no signifidifference between 15 μM and 40 μM

2.1.2 miR-19b 抑制物成功地增加了 SOCS1 蛋白的表达采用免疫印迹试验检测 0 μM、15 μM、40 μM 三种不同浓度的 miR-19b抑制物干预鼻咽癌 C666-1 细胞后的 SOCS1 蛋白因子表达水平。WB 检测结果显示，15 μM 与 40 μM 比 0 μM 的 SOCS1 蛋白因子表达水平显著上升，差异具有统计学意义（P＜0.01，图 2A），表达量的统计柱图如图 2B。40 μM和 15 μM miR-19b 抑制物浓度的转染效率较高，15 μM 与 40 μM 的 miR-19b抑制物浓度转染效率无明显差异，则之后均使用 15 μM miR-19b 抑制物浓度对 C666-1 细胞进行转染，进行后续实验。

抑制物抑制 C666-1 细胞增殖. miR-19b 抑制物和对照 miRNA 转染 24, 48 小时后, CCK-8 检测细胞增殖的改变 (*P＜0.05，**P＜0.019b inhibitor inhibit proliferation of C666-1 cells. After miRCURY LNAtors or negative control) transfected into C666-1 cells for 6, 12, 24 and were used to evaluate proliferation of cells (*P＜0.05，**P＜0.01)表 2 C666-1 细胞转染 miR-19b 抑制物后细胞 OD 值 2 The absorbance value of C666-1 cells after miR-19b inhibitor trans N OD 值 P 值ti-miR-con 4 0.77±0.01 0.046ti-miR-19b 4 0.56±0.03ti-miR-con 4 1.20±0.07 0.002
【参考文献】

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本文编号：2838773