miR-101表达上调抑制视网膜母细胞瘤的增殖及侵袭能力的研究
发布时间：2020-10-14 03:16
目的研究miR-101表达上调对视网膜母细胞瘤增殖及侵袭能力的抑制并探讨其作用机制。方法培养视网膜母细胞瘤细胞HXO-Rb44,微核糖核酸-101(micro Ribonucleic Acid-101,miR-101)模拟物及miR-101阴性对照物转染HXO-Rb44细胞,并设置正常HXO-Rb44细胞为空白组,通过RT-PCR及western blot实验分别检测miR-101模拟物组及miR-101阴性对照物组及视网膜母细胞瘤细胞HXO-Rb44空白对照组细胞中miR-101及组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶(Human Histone-lysine N-methyltransferase,EZH2)的表达;通过MTT实验及Transwell实验测定各组细胞的增殖及侵袭能力;最后通过荧光素酶报告基因实验确定miR-101和EZH2的靶点关系。结果miR-101表达组中miR-101相对表达量明显高于空白组和阴性对照组(P0.05)。EZH2在空白组和阴性对照组相对表达水平明显高于miR-101组(P0.05);miR-101表达组中EZH2的OD_(490)值明显低于空白组和阴性对照组(P0.05);空白组和阴性对照组中EZH2穿透膜数量显着高于miR-101组(P0.05);EZH2是miR-101的靶点。结论miR-101的表达上调抑制HXO-Rb44细胞的增殖及侵袭能力,其作用机制同EZH2有关。
【学位单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R739.7
【部分图文】：
图 1 转染后在 HXO-Rb44 细胞中 miR-101 表达，通过 miR-101 上调抑制EZH2 表达图注：（A）RT-PCR 检测 miR-101 在转染后 HXO-Rb44 细胞中的表达；（B）RT-PCR检测 EZH2 mRNA 在转染后 HXO-Rb44 细胞中的表达；（C）Western blot 检测 EZH2 蛋白在转染后 HXO-Rb44 细胞中的表达。注：*与空白组和阴性对照组相比，P < 0.05。（二）miR-101 表达上调抑制 HXO-Rb44 细胞的增殖及侵袭能力空白组和阴性对照组细胞在各个时间点的 OD490值差异并不大，且 24 h 时，三组细胞之间的OD490值差异也不明显。但48 h时，miR-101表达组细胞的OD490值明显低于空白组及阴性对照组，且 72 h 及 96 h 时，miR-101 表达组细胞的OD490值也显著低于其他两组（P < 0.01）（图 2A）。此外，培养 48 h 时，miR-101 表达组穿过膜的细胞数量（51±6）显著低于空白组（97±11）及阴性对照组（92±8）（图 2B，C）。
14图 2 miR-101 上调后抑制 HXO-Rb44 细胞的增殖及侵袭能力图注：（A）MTT 法检测上调 miR-101 表达后对 HXO-Rb44 细胞增殖能力的影响；（B，Transwell 检测上调 miR-101 表达后对 HXO-Rb44 细胞侵袭能力的影响。注：*与空白和阴性对照组相比；#与空白组和阴性对照组相比。（三）EZH2 是 miR-101 的靶向遗传物质
Target Scan 在线预测结果证明 EZH2 mRNA 与 miR-101 的结合靶点为3'-UTR 区（图 3A）。荧光素酶报告基因实验结果表明，MT+mimics 组与 MT+NC组荧光素酶活性强度无明显影响；但 WT+mimics 组荧光素酶活性强度比WT+NC 组降低约 52.1%，区别有统计学明显性(P < 0.01)(图 3B)。
【参考文献】
本文编号：2840097
【学位单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R739.7
【部分图文】：
图 1 转染后在 HXO-Rb44 细胞中 miR-101 表达，通过 miR-101 上调抑制EZH2 表达图注：（A）RT-PCR 检测 miR-101 在转染后 HXO-Rb44 细胞中的表达；（B）RT-PCR检测 EZH2 mRNA 在转染后 HXO-Rb44 细胞中的表达；（C）Western blot 检测 EZH2 蛋白在转染后 HXO-Rb44 细胞中的表达。注：*与空白组和阴性对照组相比，P < 0.05。（二）miR-101 表达上调抑制 HXO-Rb44 细胞的增殖及侵袭能力空白组和阴性对照组细胞在各个时间点的 OD490值差异并不大，且 24 h 时，三组细胞之间的OD490值差异也不明显。但48 h时，miR-101表达组细胞的OD490值明显低于空白组及阴性对照组，且 72 h 及 96 h 时，miR-101 表达组细胞的OD490值也显著低于其他两组（P < 0.01）（图 2A）。此外，培养 48 h 时，miR-101 表达组穿过膜的细胞数量（51±6）显著低于空白组（97±11）及阴性对照组（92±8）（图 2B，C）。
14图 2 miR-101 上调后抑制 HXO-Rb44 细胞的增殖及侵袭能力图注：（A）MTT 法检测上调 miR-101 表达后对 HXO-Rb44 细胞增殖能力的影响；（B，Transwell 检测上调 miR-101 表达后对 HXO-Rb44 细胞侵袭能力的影响。注：*与空白和阴性对照组相比；#与空白组和阴性对照组相比。（三）EZH2 是 miR-101 的靶向遗传物质
Target Scan 在线预测结果证明 EZH2 mRNA 与 miR-101 的结合靶点为3'-UTR 区（图 3A）。荧光素酶报告基因实验结果表明，MT+mimics 组与 MT+NC组荧光素酶活性强度无明显影响；但 WT+mimics 组荧光素酶活性强度比WT+NC 组降低约 52.1%，区别有统计学明显性(P < 0.01)(图 3B)。
【参考文献】
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本文编号：2840097
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