C57BL/6J小鼠耳蜗KCNQ1和NKCC1通道蛋白的年龄相关性表达及其与听力的关系

发布时间：2020-12-30 13:46

　　目的研究KCNQ1和NKCC1这两种通道蛋白在C57BL/6J小鼠耳蜗侧壁的年龄相关性表达,并分析这两种通道蛋白与年龄相关性听力下降（Age-related Hearing Loss, AHL）的关系及其在听力中的作用。方法通过听性脑干反应（Auditory Brainstem Response, ABR）检测C57BL/6J小鼠各年龄段（4、8、14、24、40周龄）的听力变化。应用免疫组织化学检测方法确定KCNQ1和NKCC1蛋白在C57BL/6J小鼠耳蜗侧壁中的表达定位,并研究各年龄段C57BL/6J小鼠耳蜗外侧壁中两种通道蛋白含量随着鼠龄增加的表达变化。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法分别检测KCNQ1和NKCC1 mRNA在不同鼠龄小鼠耳蜗中的表达水平。结果随着C57BL/6J小鼠年龄的增加,其ABR反应阈值逐渐升高,4周龄和8周龄C57BL/6J小鼠对Click和4kHz、8kHz刺激声的ABR反应阈值均无显著性差异（P>0.05）,从14周龄后,C57BL/6J小鼠对三种刺激声的ABR反应阈逐渐增加,其数值与低龄组小鼠相比,差异均有统计学意义（P<0.... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：43 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

示KCNQ1蛋白在C57BL/6J小鼠耳蜗中的表达及其随着年龄的变化，绿色荧光代表KCNQ1

2. KCNQ1 和 NKCC1 蛋白在 C57BL/6J 小鼠耳蜗外侧壁的定位及表达变化FITC 标记的二抗和 DAPI 双重荧光免疫组织化学染色显示，在 4 周龄 C57BL/6小鼠耳蜗外侧壁，KCNQ1 蛋白主要表达于耳蜗血管纹边缘细胞顶膜处，在切片上表现为一条明显的绿色荧光带。而 NKCC1 蛋白主要表达于耳蜗血管纹边缘细胞底侧膜、螺旋韧带和螺旋缘下的纤维细胞，在毛细胞周围也有少量表达。（见图 2）

表示 NKCC1 蛋白在 C57BL/6J 小鼠耳蜗中的表达及其随年龄的变化，绿色荧光性阳性染色，蓝色荧光为非特异性的核染色。A1~A3 为阴性对照，B1~B3、C1~3 和 F1~F3 分别为 NKCC1 在 4、8、14、24 和 40 周龄 C57BL/6J 小鼠耳蜗的表NQ1 和 NKCC1 mRNA 在 C57BL/6J 小鼠耳蜗的表达水平RT-PCR 检测 4 周、8 周、14 周、24 周、40 周龄时 C57BL/6J 小鼠耳蜗KCC1 mRNA 的表达水平。对各年龄组小鼠耳蜗提取的 RNA 进行逆 KCNQ1（127bp）、NKCC1（150bp）与 GAPDH（113bp）三种引物产物进行琼脂糖凝胶电泳，然后在紫外灯下观察。（分别见图 5、6）

【参考文献】：
期刊论文
[1]兔角膜内皮细胞Na+-K+-ATP酶活性检测及其意义[J]. 刘蓉,张林,段惠萍.  中国误诊学杂志. 2009(08)
[2]耳蜗血管纹钾钠氯化合物协同转运子对年龄相关性听力下降的影响[J]. 褚汉启,熊浩,崔永华,黄孝文,韩方,吴振恭,周良强,孔维佳.  中华老年医学杂志. 2007 (03)



本文编号：2947745