miR-204/211对RPE分化及去分化的影响

发布时间：2021-01-26 02:08

　　视网膜色素上皮细胞（the retinal pigment epithelium，RPE）在功能异常、病变或死亡时会引发多种严重的视网膜疾病。对于这些疾病，目前普遍采用的是细胞移植治疗方法。但是，由于细胞来源有限，并存在免疫排斥反应，RPE移植治疗有很大局限性。为此，需要人工体外生产大量的RPE用于视网膜相关疾病的治疗。但是目前人们对于RPE分化机制还了解不够，迫切需要对其分化机制深化研究。本实验室之前已经探索过RPE分化过程的情况，得到了较为详细的数据，我在此基础上进一步研究miRNA对RPE分化及去分化的机制。本研究选择ARPE-19及hfRPE两个不同的RPE系作为研究材料，针对RPE分化相关信号通路中的关键成员，分析其潜在的miRNA作用靶点，找到可能对其起调控作用的miRNAs。然后通过QPCR检测，免疫染色，流式细胞周期分析及双荧光酶标报告基因验证等方法，确定了miR-204/211对RPE分化及去分化的关键调控作用。研究结果小结如下：1.通过文献挖掘及生物信息学分析，我们获得了一批可能调控RPE分化和功能维持的miRNAs。采用QPCR方法鉴定出在两个细胞系中均高表达的m... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

视网膜结构示意图及视网膜色素变性Figure1Schematicdiagramoftheretinaandretinalpigmentdegeneration

另一种相对成熟的细胞类型（图 2）。目前，谱系重编程已经证实能有效将终末分化的成纤维细胞成功的神经元样细胞[33; 34]、肝脏前体样细胞[35]、心肌细胞等[36; 37]。慧等构建了参与视网膜发育的不同时期和 RPE 形成 8 个转录因，Pax6，Mitf，Otx2 ，Nrl ， Klf4 和 c-myc）组成的逆转录病将人成纤维细胞直接重编程为视网膜色素上皮样细胞；并且通过t1::EGFP 报告基因系统，检测到 RPE 特异性基因的有效表达[38]。在外源转录因子的作用下能够直接谱系重编程为 RPE。

专一性 RNA 内切酶 Dicer 进一步进行加工，将其加工成长度 miRNA：miRNA*双螺旋结构。最后，由解旋酶负责将双螺并结合到 RISC 中，与靶基因结合形成基因沉默复合体，最抑制靶基因的翻译[54; 55; 56]（图 3）。


本文编号：3000291