树鼩形觉剥夺性弱视对视网膜视锥细胞及双极细胞的影响

发布时间：2021-06-06 19:22

　　[目的]初步探索携带不同启动子同种血清型的重组腺相关病毒（rAAV）在正常树鼩视网膜中传导及转染的情况,为通过基因载体传导技术治疗视网膜疾病提供实验依据。观察形觉剥夺性弱视树鼩视网膜中视锥细胞以及双极细胞的数量和结构是否有改变,初步探讨弱视疾病发生发展过程中视网膜的可塑性改变,为进一步认识、了解弱视有关的发病机制提供理论依据。[方法]1.树鼩选用出生50天的正常树鼩10只,病毒选用rAAV-mCAR-mCherry-WPREs-pA 和 rAAV-Grm6-SV40-EYFP-WPRE-pA 两种含不同启动子的rAAV9型病毒,分别经眼部注射视网膜下间隙。病毒注射28天后进行取材,分别制作视网膜平铺片及视网膜冰冻切片,通过荧光显微镜及激光共聚焦显微镜观察视网膜视锥细胞及双极细胞的转染情况。2.选取出生18天左右未开眼的树鼩幼崽共36只,随机分为6组,建立形觉剥夺性弱视模型:形觉剥夺性弱视模型组:N1（缝合右眼2月,共6只）、N4（缝合右眼1月,共6只）;形觉剥夺性弱视恢复模型组:N2（缝合右眼1月后打开,双眼正常视物1月,共6只）、N3（缝合右眼1月后打开,换行遮盖左眼1月,共6只）;... 

【文章来源】：昆明医科大学云南省

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２独立送风隔离词养笼??２．?２重组腺相关病毒包装??（１）?ｒＡＡＶ－ｍＣＡＲ－ｍＣｈｅｒｒｙ－ＷＰＲＥｓ－ｐＡ质粒构建，以??

２．?３?ｒＭＶ－ｍＣＡＲ－ｍＣｈｅｒｒｙ－ＷＰＲＥｓ－ｐＡ?和?ｒＭＶ－Ｇｒｍ６－ＳＶ４０－ＥＹＦＰ－ＷＰＲＥ－ｐＡ?经眼视网??膜注射??（１）制作、准备注射针（图３）：将毛细采血管加热后经拉针仪器，使针??头孔径被拉至ｌＯＯｕｍ大小，检查针头通畅性并用酒精消毒。将１０ｕｌ微量进样针??内注满石蜡油，针头内也注满石蜡油后，插到进样器上，用胶枪密封针头与进样??器之间的缝隙，检查其密闭性。??二?”赏—?？?＇?－?？?：?■?？．?：?？?■?．．??图３密封后微量注射器及针头??２０??

第一部分「ＡＡＶ９在树駒视网膜中应用的可行性???（２）注射前一天下午树駒经１％阿托品滴眼液散瞳１次，注射当天上午８：??０？１０：?００注射前２ｈ，给予复方托吡卡胺滴眼液快速散瞳，每３０?ｍｉｎ?１次，４??（对照眼给予相同术前准备）。??（３）所有的手术都是在专用的动物眼科手术实验室中，在无菌的条件下进??的，将树駒从独立送风隔离笼具中取出，称重后放在超净工作台上，按照２％??巴比妥５ｎｉｌ／ｋｇ，进行全身麻醉，钳夹四肢没有明显反射反应后，剪掉部分较长??须、备皮，放在３６．?５°Ｃ保温台上维持体温，头部垫高，用碘伏消毒液进行右??皮肤消毒，眼表滴入盐酸奥布卡因滴眼液局部麻醉，５分钟后再滴入复方托吡??胺滴眼液，助手固定树齣的体位，眼科手术显微镜下观察其右眼瞳孔扩大，眼??滴少量生理盐水形成透镜效应观察眼底后，用眼科镊将上下眼睑拉开，充分暴??眼球，在眼颞上方先用３０Ｇ快穿针头，针头斜面向上垂直进入巩膜全层的７５％??度时，将针尖方向改为平行于巩膜前表面进入，制作隧道（图４）。??

【参考文献】：
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本文编号：3214991