重组干扰素诱导蛋白-10对人视网膜毛细血管内皮细胞作用的研究

发布时间：2017-08-18 05:20

  本文关键词：重组干扰素诱导蛋白-10对人视网膜毛细血管内皮细胞作用的研究

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【摘要】：背景与目的 糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy, DR）、视网膜中央静脉阻塞（central retinalvein occlusion, CRVO）、早产儿视网膜病变（retinopathy of prematurity, ROP）等多种视网膜相关疾病与新生血管的发生有密切联系。当这些新生血管发生渗漏、出血、纤维增生而造成视网膜水肿、视网膜玻璃体出血或牵引视网膜脱离时，则可以导致视力下降或丧失。血管新生是一个相当复杂的过程，由已形成的血管内皮细胞冲破血管壁的基底膜，迁移、增殖和连接组成新的血管。一些研究结果表明，重组干扰素诱导蛋白-10（interferon-inducible protein-10, IP-10）能够与CXC趋化因子受体3（chemokinereceptor3, CXCR3）结合发挥抗血管作用，并且人的多种血管内皮细胞均不同程度地表达CXCR3。IP-10抑制视网膜新生血管生成作用已有报道，但对内皮细胞作用的具体机制目前尚不清楚。本研究旨在通过检测IP-10对人视网膜毛细血管内皮细胞（human retinal microvascular endothelial cells, HREC）增殖、迁移和管腔形成能力的影响，并以人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVEC）作为参照，探讨其抑制视网膜新生血管生成的途径及特异性作用，以期对视网膜新生血管的研究提供新的理论依据及治疗靶点。 材料与方法 1、常规消化HREC和HUVEC，分别收集约1×10~6个细胞，以逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction, RT-PCR）方法检测两种细胞CXCR3mRNA的表达情况。 2、分别收集HREC和HUVEC，调整细胞浓度至5000个/100μl，以每孔100μl接种于96孔板，以不同浓度IP-10（0，10，100，1000ng/ml）作用于孔内细胞24h后，每孔加入CCK810μl，37℃，5%CO2孵育箱内继续孵育4h后，酶联检测仪450nm波长处测定吸光度（OD值）。 3、HREC和HUVEC两种细胞贴壁生长后，移液枪尖垂直培养板划痕，及时拍照。设置3个IP-10浓度组，干预24h后再次拍照，软件测量计算细胞加药前后迁移距离。 4、根据IP-10浓度分成0ng/ml、10ng/ml、100ng/ml组及1000ng/ml4个组，Matrigel体外三维成型法检测IP-10对HREC和HUVEC管腔形成能力的影响。 结果 1、RT-PCR检测结果显示，HREC和HUVEC两个细胞株均在基因水平表达IP-10受体CXCR3。 2、CCK-8增殖分析法结果显示IP-10抑制HREC增殖，在0~1000ng/ml范围随浓度增加增殖抑制率有上升趋势（F=6.202，P0.05），各浓度对HUVEC的增殖均无明显影响（F=1.183，P0.05）。 3、细胞划痕迁移实验中IP-10在剂量10ng/ml和100ng/ml干预时，HREC和HUVEC迁移距离均小于对照组的迁移距离，差异有统计学意义（F=25.373，P0.05；F=23.858，P0.05）。 4、Matrigel体外三维成型实验中，10、100ng/ml IP-10对HREC完整管腔形成数量无明显影响，1000ng/ml IP-10可使HREC完整管腔形成数量明显减少，差异有统计学意义（F=5.359，P0.05）。 结论 1、HREC和HUVEC二种血管内皮细胞均在基因水平表达CXCR3。 2、干扰素诱导蛋白-10对HREC的增殖、迁移及管腔形成均有抑制作用，，对HUVEC的迁移有抑制作用。
【关键词】：干扰素诱导蛋白-10 人视网膜毛细血管内皮细胞 人脐静脉血管内皮细胞 新生血管
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R774.1
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-12
• 参考文献11-12
• 第一部分 人视网膜毛细血管内皮细胞 CXCR3 的表达12-25
• 材料与仪器13-15
• 实验方法15-20
• 结果20
• 讨论20-22
• 结论22
• 参考文献22-25
• 第二部分 IP-10 对人视网膜毛细血管内皮细胞作用的探讨25-36
• 材料与仪器26-27
• 实验方法27-28
• 结果28-30
• 讨论30-33
• 结论33
• 参考文献33-36
• 附图36-37
• 全文总结37-38
• 综述38-47
• 参考文献44-47
• 英文缩略词表47-48
• 攻读学位期间公开发表的论文48-49
• 本研究所获的基金资助49-50
• 致谢50-51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

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本文编号：692864