NF-κB在特发性眼眶炎性假瘤发病过程中作用的研究

发布时间：2017-08-20 19:55

  本文关键词：NF-κB在特发性眼眶炎性假瘤发病过程中作用的研究

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【摘要】：特发性眼眶炎性假瘤（Idiopathic Orbital Inflammatory Pseudotumor，IOIP）是一种常见的眼眶疾病，，由炎症细胞浸润和纤维化反应造成的损害，是一种软组织肿瘤。因病因和发病机制不明，诊断与治疗相当困难，一直是眼科领域研究的重点难点之一，研究该病的发病机制显得极为迫切。 核因子κB（nuclear factor-κB, NF-κB）是一类广泛存在于真核细胞内的转录因子，能与多种细胞基因启动子或增强子序列特定位点发生特异性结合而促进转录和表达，与炎症反应、免疫应答以及细胞的增生、转化和凋亡等重要的病理生理过程密切相关。本研究通过收集临床IOIP样本，研究NF-κB在IOIP发病过程中的作用，主要完成了以下工作： 1．建立眼病标本库。收集临床眼病相关样本近200例，其中IOIP样本约70例，病理样本包括血样和组织，血样离心后将血浆与血细胞分离，血细胞用于提取血DNA用。组织一部分做石蜡切片后进行HE染色，从而根据组织细胞类型将样本分类。剩余组织用于提取蛋白质，RNA及做原代细胞培养，以用于后续实验。标本库的建立为IOIP的研究奠定坚实的基础，具有重要意义。 2．采用免疫组织化学、免疫细胞化学、免疫荧光化学、Western blot及real-timeRT-PCR等方法研究IOIP样本中NF-κB亚单位p50和p65，阻遏物IκB，IκBζ及磷酸化的p65（p-p65）的表达情况，并采用表达谱芯片研究NF-κB相关基因的表达情况和悬浮芯片系统研究NF-κB相关细胞因子的表达。实验结果显示：（1）p65在IOIP样本中表达上调，阳性位于IOIP胞浆、胞核中，部分样品中p65已转入细胞核中发挥转录激活作用。IκBζ在IOIP样本中呈胞核强阳性表达，NFKBIZ基因表达上调。p-p65在IOIP中呈胞核强阳性表达。p50阳性位于胞浆、胞核。IκBα在IOIP样本中呈胞浆阳性表达，部分胞核阳性。（2）NF-κB/p65、p50、IκBα及IκBζ阳性定位主要在小淋巴细胞，上皮细胞及纤维细胞中。（3）NF-κB二聚体形式主要为p65-p50，同时存在p65-p65，p50-p50。（4）本研究采用术中病理组织原代培养，发现IOIP原代细胞主要为纤维细胞。p65、IκBα、IκBζ在纤维细胞中呈胞浆、胞核强阳性表达，所以，IOIP的纤维化机制可能与NF-κB通路的激活有关。（5）本研究表达谱芯片结果显示，IOIP样本中NF-κB相关部分基因表达上调，NF-κB信号通路可能被激活。液相悬浮芯片检测结果显示,IOIP组的MIF值与对照组的MIF值之间存在显著性差异。 综上所述，本研究表明IOIP样本中NF-κB信号通路被激活，NF-κB与IOIP的发病机制有关，为IOIP的诊断及治疗提供理论依据。
【关键词】：特发性眼眶炎性假瘤（IOIP） NF-κB 炎症
【学位授予单位】：北京工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R777.5
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 第1章 绪论12-24
• 1.1 特发性眼眶炎性假瘤概述12-16
• 1.1.1 临床症状12
• 1.1.2 病理学特征12-13
• 1.1.3 临床分型13
• 1.1.4 诊断与治疗13
• 1.1.5 IOIP 发病机制的研究现状13-16
• 1.2 NF-κB 概述16-21
• 1.2.1 NF-κB 信号通路概述16-19
• 1.2.2 NF-κB 信号通路的激活19-21
• 1.3 NF-κB 在 IOIP 发病机制中的研究21-22
• 1.4 本课题的研究内容及意义22-24
• 第2章 样本库建立24-42
• 2.1 实验材料24-26
• 2.1.1 主要仪器24-25
• 2.1.2 主要试剂25-26
• 2.2 实验方法26-31
• 2.2.1 血样处理26
• 2.2.2 组织样品处理26-31
• 2.3 实验结果及讨论31-40
• 2.3.1 血样信息32-33
• 2.3.2 组织信息33-40
• 2.4 本章小结40-42
• 第3章 NF-κB 相关蛋白在 IOIP 中的表达42-68
• 3.1 实验材料43-46
• 3.1.1 主要仪器43
• 3.1.2 主要试剂43-44
• 3.1.3 重要试剂的配方44-46
• 3.2 实验方法46-52
• 3.2.1 免疫组织化学46-48
• 3.2.2 免疫荧光化学48
• 3.2.3 免疫细胞化学48-49
• 3.2.4 免疫印迹法（Western blot）49-50
• 3.2.5 Real-time RT-PCR50-52
• 3.3 实验结果及讨论52-66
• 3.3.1 p50 在 IOIP 中的表达52-54
• 3.3.2 p65、p-p65 在 IOIP 中的表达54-59
• 3.3.3 IκBα在 IOIP 中的表达59-61
• 3.3.4 IκBζ在 IOIP 中的表达61-63
• 3.3.5 讨论63-66
• 3.4 本章小结66-68
• 第4章 NF-κB 相关炎性因子在 IOIP 中的表达68-76
• 4.1 实验材料68-69
• 4.1.1 样本材料68
• 4.1.2 芯片材料68-69
• 4.1.3 主要仪器69
• 4.1.4 主要试剂69
• 4.2 实验方法69-70
• 4.2.1 基因表达谱芯片研究69-70
• 4.2.2 液相芯片检测70
• 4.3 实验结果70-75
• 4.3.1 基因表达谱芯片检测结果70-71
• 4.3.2 悬浮芯片检测结果71-72
• 4.3.3 IL-1β的基因表达和蛋白表达结果72-73
• 4.3.4 讨论73-75
• 4.4 本章小结75-76
• 结论76-78
• 参考文献78-84
• 附录84-86
• 1. 附表84-86
• 攻读硕士学位期间所发表的学术论文86-88
• 致谢88

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