Myocilin蛋白对原发性开角型青光眼小梁网细胞FN表达及细胞迁移与粘附的影响

发布时间：2017-08-31 14:00

  本文关键词：Myocilin蛋白对原发性开角型青光眼小梁网细胞FN表达及细胞迁移与粘附的影响

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【摘要】：目的建立原发性开角型青光眼（Primary open angle glaucoma,POAG）小梁网细胞体外原代培养体系；分析不同浓度重组myocilin蛋白对POAG小梁网细胞纤维连接蛋白(fibronectin，FN)表达及对细胞迁移、粘附功能的影响，探讨myocilin蛋白与原发性开角型青光眼发病的关系。 方法运用组织块培养法，进行体外细胞原代和传代培养，取传3代的小梁网细胞分别加入含重组myocilin蛋白终浓度为0ug/m（l对照组）、0.5ug/ml、1ug/ml、1.5ug/ml、2ug/ml、2.5ug/ml的无血清培养基，继续培养24小时后，运用Westernblot、Elisa法分别检测小梁网细胞内以及细胞培养液中FN的表达水平；并运用Transwell小室法、CCK-8法检测myocilin蛋白对所培养传3代POAG小梁网细胞迁移、粘附的影响。 结果1、组织块长出的细胞经倒置显微镜观察、免疫细胞化学抗原表达检测，证实体外培养细胞为POAG小梁网细胞；2、Western blot检测结果: FN/β-actin比值分别为33.4±1.0、28.9±0.8、21.6±0.9、15.9±1.1、11.9±0.8。0.5ug/ml组与对照组相比差异无统计学意义(P=0.09，P0.05）；1.0ug/ml、1.5ug/ml、2ug/ml、2.5ug/ml组与对照组的差异有统计学意义(P均为0.00，P0.05)。3、Elisa法检测各组细胞培养液中FN浓度为：0.4654±0.0039ug/ml、0.4596±0.0032ug/ml、0.4216±0.0037ug/ml、0.4214±0.0039ug/ml、0.4043±0.0039ug/ml、0.3806±0.0071ug/ml。0.5ug/ml组与对照组相比差异无统计学意义(P=0.12，P0.05）；1.0ug/ml、1.5ug/ml、2ug/ml、2.5ug/ml组与对照组的差异有统计学意义(P均为0.00，P0.05)。4、Transwell小室法检测结果显示：对照组和实验组细胞数分别为16.40±4.0373，8.60±2.0736，实验组细胞迁移数较对照组少，实验组与对照组的差异有统计学意义(P=0.005，P0.05）。5、运用CCK-8法检测各组细胞吸光度值的均值分别为1.9814±0.1624、1.8848±0.0267、1.4895±0.0916、1.4120±0.1087、1.3392±0.1391、1.0310±0.0639。0.5ug/ml组与对照组相比，差异无统计学意义（P=0.30，，P0.05）；1ug/ml、1.5ug/ml、2ug/ml、2.5ug/ml组与对照组相比差异有统计学意义（P值均为：0.00，P0.05）。 结论1、myocilin蛋白能抑制POAG小梁网细胞纤维连接蛋白的表达，并呈现一定的剂量依耐性；2、myocilin蛋白可降低POAG小梁网细胞的迁移和粘附能力。
【关键词】：细胞培养 myocilin蛋白 原发性开角型青光眼 迁移小室 粘附
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R775.2
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 英文缩略词表7-8
• 引言8-10
• 一 材料10-14
• 二 方法14-22
• 三 结果22-28
• 四 讨论28-33
• 全文结论33-34
• 参考文献34-36
• 致谢36-37
• 综述37-46
• 参考文献43-46

【参考文献】

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1 徐浩翔;王宝玺;;波形蛋白与疾病关系的研究进展[J];基础医学与临床;2009年10期

2 钟丽春,李梅,李美玉;人眼小梁细胞体外培养与细胞鉴定[J];眼科学报;1998年04期

3 葛坚,卓业鸿,郭彦,明文玉,银巍;Gene mutation in patients with primary open angle glaucoma in a pedigree in China[J];Chinese Medical Journal;2000年03期

4 贺翔鸽,李美玉;人眼小梁细胞培养及免疫组化特性研究[J];中华眼科杂志;1998年04期

5 胡艳;吴瑜瑜;;纤维连接蛋白对原发性开角型青光眼小梁网细胞整合素α5β_1表达的影响[J];江苏医药;2012年14期

本文编号：765984