肺炎链球菌和不可分型流感嗜血杆菌二次感染诱导急性中耳炎模型的机制研究
发布时间：2017-09-28 13:21
本文关键词：肺炎链球菌和不可分型流感嗜血杆菌二次感染诱导急性中耳炎模型的机制研究
【摘要】：目的 建立一种肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae, S.pn）定植在鼻腔后，以不可分型流感嗜血杆菌（Nontypeable haemophilus influenzae,NTHi）二次感染，接种至小鼠鼓室内引起急性中耳炎（Acute OtisisMedia, AOM）模型的实验方法。并以此为对象对二次感染机制进行研究。 方法 1.选择健康SPF级C57BL/6J小鼠，用注射器刺穿鼓膜向鼓室中接种106、107、108CFU/耳三种浓度的NTHi作为实验组，，以向鼓室中注射PBS的小鼠为对照组。建模后每日称重并观测小鼠日常行为及状态。建模后1、3、5、7天时，各组分别处死，采集血清及中耳灌洗液上清用ELISA检测细胞因子，取中耳灌洗液中细胞进行流式细胞术观察，取听泡固定并脱钙，进行石蜡切片并作HE染色。从各方面判定急性中耳炎模型是否建立成功。 2.先以S.pn19F给C57BL/6J小鼠滴鼻，以便S.pn在鼻腔定植，然后再经鼓膜穿刺注入NTHi，建立二次感染中耳炎模型，观察小鼠日常行为及称重，取心脏血和中耳灌洗液进行细菌培养，计数中耳灌洗液中细胞数量，并检测中耳灌洗液上清和血清中的细胞因子含量变化。 结果 1.体重：PBS组Day1有少许下降，之后稳步上升，而NTHi组则Day1、Day2体重下降之后延迟到Day3体重才开始恢复。细胞计数中可见炎性细胞浸润主要以中性粒细胞为主，可达99%，但PBS组中细胞总数远远小于NTHi各组。中耳组织切片可以见到脓性物渗出，大量炎症细胞浸润，偶见中耳骨结构遭破坏，血清及中耳灌洗液中细胞因子：中耳灌洗液上清中IL-6和TNFα升高，而血清中各细胞因子无变化。 2.体重：coIF组小鼠在滴鼻后，体重有所下降，但在于NTHi同时接受鼓膜穿刺后，体重下降水平相同，无统计学差异。细菌清除能力：coIF组小鼠与NTHi组小鼠中耳腔中细菌清除能力无差异。细胞计数：coIF组中耳腔中的炎性细胞募集增多。细胞因子：同时IL-1β及TNF-α的表达均高于NTHi组。 结论 本研究成功建立了NTHi致急性中耳炎模型以及S.pn与NTHi二次感染致急性中耳炎模型，并对该模型中耳微环境中的炎症细胞和炎症因子进行了检测，为后续研究微生物与微生物、多种微生物与宿主之间的相互影响打下了基础。
【关键词】：NTHi S.pn 二次感染 急性中耳炎
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R764.21
【目录】：
- 英汉缩略语名词对照5-6
- 摘要6-8
- ABSTRACT8-11
- 第一部分 NTHi 诱导急性中耳炎的模型建立11-23
- 前言11-12
- 1 实验材料12-14
- 2 实验方法14-16
- 3 实验结果16-21
- 4 讨论21-23
- 第二部分 NTHi 与 S.pn 二次感染诱导急性中耳炎的模型建立23-32
- 前言23-24
- 1 实验材料24-25
- 2 实验方法25-26
- 3 实验结果26-30
- 4 讨论30-32
- 全文总结32-33
- 参考文献33-36
- 综述：分泌性中耳炎中相关细胞因子功能的研究进展36-42
- 参考文献40-42
- 致谢42-43
- 攻读学位期间的研究成果及发表的学术论文目录43-44
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本文编号：936066
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