中耳胆脂瘤上皮细胞的体外培养及增殖能力的初步研究

发布时间：2017-10-02 07:32

  本文关键词：中耳胆脂瘤上皮细胞的体外培养及增殖能力的初步研究

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【摘要】：第一部分中耳胆脂瘤上皮细胞的原代培养及鉴定[目的] 探索中耳胆脂瘤上皮细胞(middle ear cholesteatoma epithelial cells, MECEC)的原代培养方法和条件,观察细胞形态学特征,并对原代培养的细胞进行鉴定,为后续实验研究奠定基础。[方法] 取乳突根治术时切取的中耳胆脂瘤组织,分离出胆脂瘤上皮后进行组织块培养,对比单纯有血清培养基培养法(有血清培养组)、有血清和无血清培养基联合培养法(联合培养组)两种培养条件下胆脂瘤上皮细胞原代培养的成功率,并对细胞进行传代培养和细胞鉴定。[结果] 联合培养组的细胞成功率较高(70.83%),细胞成典型的“铺路石样”生长；有血清培养组的细胞成功率较低(33.33%),而且细胞中混有成纤维细胞,差异有统计学意义(P0.05)。培养出的细胞可传代1-2代,免疫荧光染色显示细胞角蛋白阳性,证实培养的细胞为上皮细胞。[结论] 用组织块法,有血清和无血清培养基联合培养比单纯有血清培养基培养,能更好,更成功地培养出中耳胆脂瘤上皮细胞,我们可以用此方法建立一种简单易行的中耳胆脂瘤上皮细胞培养方法。 第二部分中耳胆脂瘤上皮细胞增殖能力的研究[目的] 通过观察中耳胆脂瘤上皮细胞(middle ear cholesteatoma epithelial cells, MECEC)和正常外耳道表皮角质形成细胞(normal external ear canalkeratinocytes,NEECK)在体外培养的生长情况,以及测定两者培养液上清中IL-6和MCP-1的分泌情况,比较MECEC和NEECK在体外培养后的增殖能力。 [方法] 将手术时从同一个病人身上取出的中耳胆脂瘤上皮组织和正常外耳道表皮组织,同时用组织块法、有血清培养基和无血清培养基联合培养的方法进行细胞培养,观察两种细胞的生长情况,测量从组织块中心到其最远端爬出细胞的距离,并用ELISA法测定两种细胞培养16天后细胞培养液上清中IL-6和MCP-1的分泌情况。[结果] 中耳胆脂瘤上皮细胞比正常外耳道表皮角质化细胞生长较快,从组织块中心到其最远端爬出细胞的距离也较长。用ELISA测得：胆脂瘤组(IL-6：1.54±0.72;MCP-1：1.44±0.20)同正常外耳道组(IL-6:0.40±0.05:MCP-1:0.60±0.30)相比,细胞培养液中的IL-6和MCP-1的分泌量前者均明显高于后者,而且差异有统计学意义(P0.05)。 [结论] 1、与正常外耳道表皮角质形成细胞相比,中耳胆脂瘤上皮细胞在体外培养时生长较快,从组织块中心到其最远端爬出细胞的距离较长。 2、与正常外耳道表皮角质形成细胞相比,IL-6和MCP-1在中耳胆脂瘤上皮细胞培养液中的分泌量较多,二者的分泌可能与中耳胆脂瘤的增殖有关。 3、我们根据中耳胆脂瘤上皮细胞爬出的距离和IL-6、MCP-1在细胞培养液中分泌量,初步证实了中耳胆脂瘤上皮细胞在体外培养时比正常外耳道表皮角质形成细胞有较强的增殖能力。
【关键词】：中耳 胆脂瘤 上皮 细胞培养 IL-6 MCP-1 细胞增生
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R764.21
【目录】：

• 主要缩略词表6-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-15
• 第一部分 中耳胆脂瘤上皮细胞的原代培养及鉴定15-28
• 1 材料和方法15-19
• 1.1 材料15-16
• 1.2 实验方法16-19
• 2 结果19-25
• 2.1 倒置显微镜下观察中耳胆脂瘤上皮细胞的生长特征19-22
• 2.2 两种培养条件下细胞培养成功率的比较22-23
• 2.3 细胞的传代培养23
• 2.4 细胞鉴定23-25
• 3 讨论25-27
• 4 结论27-28
• 第二部分 中耳胆脂瘤上皮细胞增殖能力的研究28-42
• 1 材料和方法29-31
• 1.1 材料29
• 1.2 实验方法29-31
• 2 结果31-35
• 2.1 中耳胆脂瘤上皮细胞和正常外耳道表皮角质形成细胞培养后比较观察31-33
• 2.2 ELISA法检测细胞培养液中IL-6和MCP-1的分泌量33-35
• 3 讨论35-41
• 4 结论41-42
• 总论42-45
• 参考文献45-50
• 综述50-57
• 参考文献55-57
• 硕士期间发表文章57-58
• 致谢58

【参考文献】

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本文编号：958336