敲低SAA基因表达对鼻咽癌CNE2细胞生长及凋亡的影响

发布时间：2017-10-07 07:04

  本文关键词：敲低SAA基因表达对鼻咽癌CNE2细胞生长及凋亡的影响

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【摘要】：目的： 利用shRNA技术沉默血清淀粉样蛋白A（SAA）表达，检测该基因表达降低对人鼻咽癌CNE2细胞生长及凋亡的影响，为揭示SAA基因表达功能提供实验依据。 方法： 采用shRNA技术，构建3组针对SAA基因的shRNA真核表达干扰载体，并进行测序及blast对比鉴定；将shRNA真核表达干扰载体瞬时转染人鼻咽癌CNE2细胞，通过PT-PCR及Western-blotting技术，筛选出有效的小干扰RNA(siRNA)序列；利用shRNA技术和高表达载体分别沉默及过表达SAA基因，分别瞬时转染CNE2细胞后，检测及验证该基因在CNE2细胞中的表达水平；运用MTT及Hoechst33258荧光染色技术，，观察及分析SAA基因的表达对CNE2细胞的生长及凋亡的影响。 结果： 成功构建针对SAA基因的shRNA真核表达干扰载体组，经测序鉴定、blast对比、 PT-PCR及Western-blotting检测，确定pGPU6/GFP/Neo-SAA-homo-482为针对SAA基因设计的最有效的干扰RNA。将pGPU6/GFP/Neo-SAA-homo-482和pCD3.1（+）-SAA瞬时转染人鼻咽癌CNE2细胞，PT-PCR及Western-blotting结果显示：pGPU6/GFP/Neo-SAA-homo-482真核干扰载体可有效沉默CNE2细胞中的SAA蛋白,pCDNA3.1（+）-SAA真核过表达载体可有效地过表达SAA蛋白，且其结果具有统计学意义（P＜0.05）；MTT及Hoechst33258荧光染色技术结果显示：SAA基因表达降低可促进CNE2细胞凋亡,增高可促进CNE2细胞生长。 结论： 1、 pGPU6/GFP/Neo-SAA-homo-482真核干扰载体可有效沉默CNE2细胞中的SAA蛋白； 2、 SAA基因沉默可促进CNE2细胞凋亡，SAA基因高表达可促进CNE2细胞生长。
【关键词】：血清淀粉样蛋白A 鼻咽肿瘤 表达载体 干扰载体
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R739.63
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-12
• 技术路线12-13
• 材料与方法13-29
• 实验结果29-43
• 讨论43-46
• 结论46-47
• 参考文献47-52
• 主要缩略词及英文索引52-53
• 综述53-60
• 参考文献57-60
• 在读期间发表的论文60-61
• 致谢61

【参考文献】

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本文编号：987535