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国产β-淀粉样蛋白聚合寡聚体的方法及效果初探

发布时间:2017-10-12 10:49

  本文关键词:国产β-淀粉样蛋白聚合寡聚体的方法及效果初探


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【摘要】:目的探讨国产人源性β-淀粉样蛋白(Aβ)聚合寡聚体的方法及其聚合效果。方法 Aβ40、Aβ42室温条件分别溶解于纯度≥99.0%的六氟异丙醇中,使Aβ浓度至1 mmol/L、20 min;高纯氮处理使六氟异丙醇完全挥发后,添加纯度≥99.5%的二甲基亚砜,使Aβ浓度至6 mmol/L,30℃水浴超声10 min;添加含0.05%十二烷基硫酸钠的磷酸盐缓冲液(0.02 mol/L,p H7.4),Aβ浓度至120μmol/L;再用上述缓冲液分别稀释Aβ至40、80μmol/L,形成3种浓度梯度。37℃恒温摇床100 r/pmin行聚合反应2、12、24、48、72、96和120 h;SDS-PAGE,银染处理,分别考察上述条件的聚合效果。结果 3种浓度的Aβ40寡聚体聚合效果有很大差异:40μmol/L聚合48、120 h,80μmol/L聚合12 h有较明显的二十二聚体出现,120μmol/L聚合≥12 h,有四聚体至十聚体形成。但3种浓度Aβ40形成寡聚体又有一定相似性:均有大量的单体、二聚体、三聚体存在,随着聚合时间延长,寡聚体总量及高分子量寡聚体形成量并未明显增加。3种浓度的Aβ42聚合效果有明显区别:随着聚合浓度升高,十二聚体、二十一聚体的形成量逐渐下降,相同聚合时间内,随着浓度的升高,四聚体至十聚体形成量逐渐增加;但3种浓度的Aβ42聚合也有相似处:均存在大量的单体、二聚体、三聚体,随着聚合时间的延长,四聚体至十聚体形成量有增加趋势,此与Aβ40聚合效果有明显差异。结论采用常用的方法均能使国产Aβ40、Aβ42形成寡聚体;总体来讲,相对于聚合时间,聚合浓度对形成高分子量的Aβ寡聚体种类影响较大。
【作者单位】: 中国医学科学院北京协和医学院输血研究所;贵州泰邦生物制品有限公司;
【关键词】β-淀粉样蛋白 聚合 寡聚体 聚合时间 聚合浓度
【基金】:四川省科技支撑计划项目(2014SZ0123)
【分类号】:R943
【正文快照】: 2002年,人静脉注射免疫球蛋白(intravenous immuno-globulin,IVIG)被发现含有天然存在的β-淀粉样蛋白(amy-loid-beta protein,Aβ)抗体[1]。由于Aβ沉积形成的老年斑是阿尔茨海默症(Alzheimer's disease,AD)患者脑组织重要的病理特征,再基于“Aβ淀粉样蛋白学说”[2],近年来,

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本文编号:1018292

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