NOX4-自噬途径介导apelin-13促单核细胞—人脐静脉内皮细胞粘附

发布时间：2017-10-12 13:44

  本文关键词：NOX4-自噬途径介导apelin-13促单核细胞—人脐静脉内皮细胞粘附

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【摘要】：目的:Apelin作为APJ受体内源性配体,具有促单核细胞-内皮细胞粘附等多种生物学效应。本实验前期研究发现,apelin通过PI3K途径诱导单核细胞向人脐静脉内皮细胞粘附。本课题拟研究apelin-13对人脐静脉内皮细胞中NOX4源ROS和自噬的影响,并在前期研究基础上进一步探讨apelin-13促单核细胞与血管内皮细胞粘附的机制,为动脉粥样硬化的治疗提供新的理论依据。方法:1、Western Blot检测人脐静脉内皮细胞NOX4、beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ、ICAM-1、β-Tublin和β-Actin的表达;2、用DCFH-DA探针检测人脐静脉内皮细胞ROS的生成,荧光显微镜观察或多功能酶标仪定量检测;3、m RFP-GFP-LC3融合蛋白的腺病毒感染人脐静脉内皮细胞,标记及追踪细胞内LC3,荧光显微镜观察细胞内自噬流;4、Calcein AM标记单核细胞,荧光显微镜和多功能酶标仪检测单核细胞-人脐静脉内皮细胞粘附情况;5、Si RNA沉默人脐静脉内皮细胞的beclin-1和LC3,观察其对细胞粘附的影响。结果:1、Apelin-13浓度依赖(0-1.0μM)和时间依赖(0-24h)诱导人脐静脉内皮细胞ROS的生成;2、Apelin-13浓度依赖(0-1.0μM)和时间依赖(0-24h)诱导人脐静脉内皮细胞NOX4的表达;3、NOX抑制剂DPI和PI3K阻断剂LY294002抑制apelin-13诱导的人脐静脉内皮细胞ROS的生成;4、Class III PI3K抑制剂3-MA抑制apelin-13(0.1μM,12h)诱导人脐静脉内皮细胞ROS水平和NOX4表达的增加;5、Apelin-13浓度依赖(0-1.0μM)和时间依赖(0-24h)诱导人脐静脉内皮细胞自噬标志蛋白beclin1和LC3-II/I的表达增加;6、Apelin-13诱导人脐静脉内皮细胞自噬流增加,加入自噬溶酶体降解阻断剂羟基氯喹不可抑制apelin-13诱导的自噬流增加;7、ROS清除剂NAC、过氧化氢的酶类清除剂Catalase和NOX抑制剂DPI抑制了apelin-13诱导人脐静脉内皮细胞自噬标志蛋白beclin1和LC3-II/I表达的增加;8、ROS清除剂NAC和过氧化氢的酶类清除剂Catalase抑制了apelin-13诱导人脐静脉内皮细胞自噬流增加;9、ROS清除剂NAC、过氧化氢的酶类清除剂Catalase、NOX抑制剂DPI和ClassⅢPI3K抑制剂3-MA抑制apelin-13促单核细胞-人脐静脉内皮细胞粘附的作用;10、Beclin1 si RNA和LC3 si RNA抑制apelin-13促单核细胞-人脐静脉内皮细胞粘附;11、自噬诱导剂Rapamycin促进单核细胞-人脐静脉内皮细胞粘附;12、ROS清除剂NAC、过氧化氢的酶类清除剂Catalase、NOX抑制剂DPI和ClassⅢPI3K抑制剂3-MA抑制apelin-13上调人脐静脉内皮细胞粘附蛋白ICAM-1表达;13、自噬诱导剂Rapamycin上调人脐静脉内皮细胞粘附蛋白ICAM-1表达。结论:ClassⅢPI3K-NOX4-ROS-自噬途径介导apelin-13促单核细胞-人脐静脉内皮粘附。
【关键词】：Apelin-13 NOX4 ROS 自噬 细胞粘附
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-10
• 主要英文缩略语索引10-14
• 第1章 绪论14-18
• 第2章 实验材料18-20
• 2.1 实验细胞18
• 2.2 主要试剂18-19
• 2.3 主要仪器19-20
• 第3章 实验方法20-24
• 3.1 细胞培养20
• 3.2 实验分组20-21
• 3.3 Western blot21-22
• 3.4 ROS检测22
• 3.5 自噬流检测22
• 3.6 检测单核细胞-人脐静脉内皮细胞粘附率22-23
• 3.7 SiRNA干扰技术23
• 3.8 统计学方法23-24
• 第4章 实验结果24-48
• 4.1 Apelin-13 诱导 HUVECs 中 ROS 生成24-26
• 4.2 Apelin-13上调HUVECs中NOX4表达26-27
• 4.3 NOX的抑制剂DPI和PI3K抑制剂LY294002对apelin-13诱导HUVECs中ROS水平上的影响27-29
• 4.4 Class III PI3K抑制剂 3-MA抑制apelin-13诱导HUVECs中ROS水平上升29-31
• 4.5 Class III PI3K抑制剂 3-MA抑制apelin-13上调HUVECs中NOX4表达31-32
• 4.6 Apelin-13诱导HUVECs中自噬标志蛋白表达增加32-33
• 4.7 Apelin-13诱导HUVECs中自噬流增加33-35
• 4.8 ROS清除剂NAC和过氧化氢的酶类清除剂Catalase抑制apelin-13诱导HUVECs中自噬标志蛋白表达增加35-36
• 4.9 NOX抑制剂DPI抑制apelin-13诱导HUVECs自噬标志蛋白的表达36
• 4.10 ROS途径介导apelin-13诱导HUVECs自噬流增加36-38
• 4.11 ROS-自噬在apelin-13促MCs-HUVECs粘附中的作用38-43
• 4.12 Apelin-13通过ROS- 自噬途径上调HUVECs粘附蛋白ICAM-1 表达43-48
• 第5章 讨论48-54
• 第6章 结论54-56
• 参考文献56-64
• 综述64-72
• 文献翻译72-80
• 作者攻读学位期间的科研成果80-82
• 致谢82-83

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1 李赫宁;NOX4-自噬途径介导apelin-13促单核细胞—人脐静脉内皮细胞粘附[D];南华大学;2015年

2 柯丽琴;NOX4介导的高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及其机制研究[D];南华大学;2008年

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本文编号：1019071