止血带休克后主动脉RAS稳态失衡在血管低反应性及损伤中的作用

发布时间：2017-10-12 13:34

  本文关键词：止血带休克后主动脉RAS稳态失衡在血管低反应性及损伤中的作用

  更多相关文章： 止血带休克 肾素血管紧张素系统 血管低反应性

【摘要】：目的肾素血管紧张素系统(renin angiotensin systems,RAS)内在稳态失衡在多种疾病及损伤中发挥重要作用。本实验主要研究止血带休克(tourniquet shock,TS)后RAS稳态失衡在血管低反应性及损伤中的作用,为揭示血管低反应发生机制及治疗策略提供新的思路。方法1 TS模型的制备:8月龄C57B6的雄性小鼠,止血带套扎双后肢阻断血流,2h后解套扎进行再灌注。实验第一部分分7组,对照组及6个模型组,模型组分别于再灌注10min、1h、2h、4h、6h、12h后处死,对照组不进行套扎与再灌注,其余操作同模型组。实验第二部分分5组,即野生对照组(WT)、野生-休克组(WT-TS)、野生-休克-给药组(WT-TS-DIZE)、血管紧张素转换酶2(Angiotensin converting enzyme 2,ACE2)的基因敲除对照组(KO)、基因敲除-休克组(KO-TS),给药组于实验前以10mg/kg/d的剂量给予ACE2的激动剂——二乙酰胺三氮脒(Diminazene Diaceturate,DIZE)进行皮下注射给药,共计28天,WT-TS、WT-TS-DIZE、KO-TS各组缺血2h再灌注4h后处死小鼠,WT、KO各组不进行套扎与再灌注,其余操作同模型组。2损伤指标的测定:多普勒血流仪测定肢体血流障碍,颈动脉插管法测定血压值,离体血管张力测定仪测定主动脉血管收缩反应性,HE染色结合透射电镜评价血管形态学损伤。3 RAS成分测定:蛋白免疫印迹法(western blot,WB)检测血管组织中血管紧张素II 1型受体(AT1)、血管紧张素(1-7)受体(Mas)、血管紧张素转换酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)、ACE2蛋白的表达。采用酶联免疫吸附法(Enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中血管紧张素II(AngiotensinⅡ,Ang II)/血管紧张素(1-7)(Angiotensin 1-7,Ang(1-7))含量。结果实验第一部分结果显示,与对照组小鼠相比,模型组小鼠肢体血流量随着再灌注时间的延长逐渐减少;血压在再灌注10min时间点先升高随后逐渐降低;主动脉血管对去甲肾上腺素(Noradrenalin,NE)的反应性在再灌注10min时间点升高随后下降、再灌注4h时间点的血管反应性最低;形态学损伤评分逐渐增高;主动脉血管AT1受体与ACE2蛋白表达下降;Mas受体与ACE蛋白表达升高;血清中AngⅡ的含量升高,Ang(1-7)的含量降低。实验第二部分结果显示,与WT-TS组相比,WT-TS-DIZE组主动脉对NE的反应性明显升高,血管损伤程度明显减轻,AT1受体、ACE2表达升高,Mas受体表达降低,ACE表达基本无变化,血清Ang II生成减少,Ang(1-7)生成增多;与WT相比,KO组主动脉血管对NE反应性升高,形态学损伤程度不明显,主动脉血管AT1、MAS、ACE蛋白表达均增高,ACE2无表达,血清Ang II生成增多,Ang(1-7)基本无变化;与WT-TS相比,KO-TS组主动脉对NE的反应性明显下降,形态学损伤程度增高不明显,主动脉血管AT1与ACE表达增高不明显,Mas增高明显(P0.05),ACE2无表达,血清AngII、Ang(1-7)变化不明显。结论1止血带休克后RAS系统激活,随着再灌注时间的延长,血管低反应性及损伤程度均增加,主动脉ACE/Ang II/AT1轴与ACE2/Ang(1-7)/Mas轴表达失衡,且两轴随再灌时间延长差异性表达愈加明显,提示RAS稳态失衡与血管低反应性的发生及损伤可能有关。2以ACE2为靶点改善RAS稳态失衡有可能提高主动脉血管的反应性、减轻血管损伤,对临床上休克晚期血管低反应性的治疗提供了新思路。
【关键词】：止血带休克 肾素血管紧张素系统 血管低反应性
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文缩略表10-11
• 引言11-13
• 第1章 止血带休克后主动脉血管反应性及RAS成分的变化13-44
• 1.1 材料与方法13-25
• 1.1.1 实验材料13-16
• 1.1.2 实验方法16-25
• 1.1.3 统计学分析25
• 1.2 结果25-32
• 1.2.1 多普勒血流值测定结果25-26
• 1.2.2 颈动脉血压测定结果26-27
• 1.2.3 血管反应性测定结果27-28
• 1.2.4 血管损伤形态学变化28-30
• 1.2.5 RAS成分测定结果30-32
• 1.3 讨论32-38
• 1.3.1 止血带休克模型血流动力学和组织学损伤特点33-36
• 1.3.2 止血带休克后RAS的表达变化36-38
• 1.4 小结38-39
• 参考文献39-44
• 第2章 ACE2蛋白上调或缺失对血管低反应性的影响44-57
• 2.1 材料与方法44-45
• 2.1.1 实验材料44
• 2.1.2 实验方法44
• 2.1.3 统计学分析44-45
• 2.2 结果45-51
• 2.2.1 血管反应性测定结果45-46
• 2.2.2 血管损伤形态学变化46-48
• 2.2.3 蛋白免疫印迹测定结果48-50
• 2.2.4 AngII、Ang(1-7)测定结果50-51
• 2.3 讨论51-54
• 2.3.1 ACE/ACE2表达失衡与血管低反应性的关系52-53
• 2.3.2 ACE/ACE2表达失衡对血管AT1/Mas受体表达的影响53
• 2.3.3 DIZE给药对血管的保护作用53-54
• 2.4 小结54
• 参考文献54-57
• 第3章 综述 休克后血管低反应性与肾素-血管紧张素系统的关系57-68
• 3.1 休克后血管低反应性发生机制概述57-59
• 3.1.1 NO过量产生及其继发性产物的生成57-58
• 3.1.2 受体失敏或下调58-59
• 3.1.3 血管平滑肌细胞(VSMC)的膜离子通道改变（膜超极化）59
• 3.1.4 钙超载及钙失敏59
• 3.2 肾素-血管紧张素系统简述59-60
• 3.3 RAS稳态失衡在血管低反应性中的作用60-63
• 3.3.1 通过氧化应激机制损伤内皮功能60-61
• 3.3.2 通过炎症反应调节血管反应性61-63
• 3.3.3 降低血管紧张素II受体敏感性63
• 3.4 结语与展望63
• 参考文献63-68
• 结论68-69
• 致谢69-70
• 导师简介70-71
• 作者简介71-72
• 学位论文数据集72

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 冉海红;张然;;肾素-血管紧张素系统通过氧化应激机制参与血管反应性的调节[J];生理科学进展;2011年02期

2 Hiromichi Suzuki;Tomohiro Kikuta;Tsutomu Inoue;Ukihiro Hamada;;Time to re-evaluate effects of renin-angiotensin system inhibitors on renal and cardiovascular outcomes in diabetic nephropathy[J];World Journal of Nephrology;2015年01期

，

本文编号：1019015