曲尼司特对高糖培养心肌成纤维细胞增殖及表型转化的作用及机制研究
本文关键词：曲尼司特对高糖培养心肌成纤维细胞增殖及表型转化的作用及机制研究
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【摘要】：目的研究曲尼司特(Tranilast,Tra)对高糖(High glucose,HG)培养乳鼠心肌成纤维细胞(Cardiac fibroblast,CFs)增殖及表型转化的作用及其作用机制。方法选用1~3天Sprague-Dawley(SD)大鼠,用75%乙醇浸泡消毒,在无菌条件下开胸取出心脏,消化,贴壁培养,CFs长至融合时消化、以1:2传代,实验用2~3代细胞。实验分组为:正常对照组(5.5 mmol·L㧟1葡萄糖);高渗对照组(葡萄糖5.5 mmol·L㧟1+甘露醇25 mmol·L㧟1);高糖组(25 mmol·L㧟1葡萄糖),曲尼司特干预组(葡萄糖25 mmol·L㧟1+曲尼司特50μmol·L㧟1,100μmol·L㧟1,200μmol·L㧟1);高糖+活化素受体样激酶7(Activin receptor-like kinase 7,ALK7)阻断剂组(葡萄糖25 mmol·L㧟1+10μmol·L㧟1 SB431542)。倒置显微镜下及HE染色观察CFs细胞形态,并对培养的CFs进行免疫荧光鉴定;噻唑蓝四氮唑(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法观测CFs增殖变化;免疫荧光双染法观察FSP-1、α-SMA表达的变化,鉴定CFs表型转化;Western blots检测FSP-1、α-SMA、TGF-β_1、ALK7蛋白表达。结果1、形态学观察及免疫学鉴定:细胞呈梭形,细胞扁平铺开,细胞核比较大,一个细胞内常常有1~3个细胞核,细胞浆透明,折光弱,无自发搏动,HE染色后可见成纤维细胞清晰的形态。免疫荧光染色后只显示红色荧光,无绿色荧光,提示FSP-1染色阳性,α-SMA染色阴性,证实为心肌成纤维细胞。2、MTT检测显示:与正常对照组比较,高糖组心肌成纤维细胞出现明显增殖,吸光度值升高(P0.01);与高糖组相比,加入不同浓度曲尼司特干预后,对心肌成纤维细胞的增殖具有显著抑制作用(P0.05),且曲尼司特干预组呈剂量依赖性;与高糖组相比,SB431542组细胞溶液吸光度值明显降低(P0.05),而高渗对照组无显著性差异。3、免疫荧光法观测显示:与正常对照组比较,高糖组细胞内FSP-1蛋白表达减少,α-SMA蛋白表达明显增多;与高糖组比较,曲尼司特干预组细胞内FSP-1蛋白表达逐渐增多,α-SMA蛋白表达逐渐减少;与高糖组比较,SB431542组FSP-1蛋白表达增多,α-SMA蛋白表达减少,而高渗对照组无显著性差异。4、Western检测显示:与正常对照组比较,高糖组FSP-1表达减少(P0.01),α-SMA表达增多(P0.01)、TGF-β_1分泌增多(P0.01),ALK7分泌增多(P0.01),高渗对照组与正常对照组比较无显著性差异;与高糖组比较,应用SB431542及不同浓度曲尼司特同步干预后,FSP-1表达明显增多(P0.05),α-SMA表达明显减少(P0.01),TGF-β_1表达明显减少(P0.05),ALK7分泌减少(P0.05)。结论高糖可引起心肌成纤维细胞增殖及表型转化,TGF-β_1、ALK7参与了其发展过程。曲尼司特能抑制高糖培养的心肌成纤维细胞增殖及表型转化,其机制可能与下调TGF-β_1、ALK7的表达有关。
【关键词】：曲尼司特 高糖 心肌成纤维细胞 肌成纤维细胞 ALK7
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R965
【目录】：
- 中文论著摘要4-6
- 英文论著摘要6-9
- 英文缩略语9-10
- 前言10-12
- 实验材料与方法12-17
- 实验结果17-25
- 讨论25-28
- 结论28-29
- 本研究创新性的自我评价29-30
- 参考文献30-34
- 附录34-44
- 一、文献综述 TGF-β/Smads信号通路在心血管疾病中的作用34-41
- 参考文献38-41
- 二、在学期间科研成绩41-42
- 三、致谢42-43
- 四、个人简介43-44
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，本文编号：1057320
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