FFJ-5的体外抗肿瘤活性及其机制的研究

发布时间：2017-10-19 22:39

  本文关键词：FFJ-5的体外抗肿瘤活性及其机制的研究

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【摘要】：目的:初步研究大叶茜草素的结构修饰物FFJ-5体外抗肿瘤活性及其对EGFR-AktPKM2信号通路的影响。方法:MTT法检测大叶茜草素及其结构修饰物FFJ-5对A549和HepG2细胞生长活力的影响;流式细胞术检测FFJ-5对A549和HepG2细胞周期的影响;Hoechst33342/PI共染高内涵活细胞成像系统分析FFJ-5对A549和HepG2细胞凋亡的影响;ATP Assay Kit检测FFJ-5对A549和HepG2细胞内ATP生成量的影响;激光共聚焦显微镜检测BCECF-AM(pH荧光探针)孵育后,FFJ-5对A549和HepG2细胞内pH的影响;Western blot检测FFJ-5对A549和HepG2细胞中EGFR、p-EGFR、Akt、p-Akt、PKM2、PARP、Cleaved PARP、Caspase3和Cleaved Caspase3等蛋白表达量的影响;激光共聚焦显微镜检测Rh 123(Rhodamine 123)染色后,FFJ-5对A549和HepG2细胞线粒体膜电位的影响。结果:(1)MTT结果显示:FFJ-5的抗肿瘤活性显著增强,Mollugin在A549和HepG2细胞中的IC50值是分别是FFJ-5的7.8倍、5.6倍。(2)流式细胞术检测结果显示:FFJ-5可呈浓度依赖性的使A549和HepG2细胞的周期阻滞在G2/M期。(3)Hochst 33342/PI共染结果显示:FFJ-5可呈浓度依赖性地诱导A549和HepG2细胞的凋亡。(4)Western blot结果显示:FFJ-5能够呈浓度依赖性的下调蛋白EGFR、p-EGFR、Akt、p-Akt、PKM2的表达。(5)ATP检测结果显示:FFJ-5呈浓度依赖性地抑制A549和HepG2细胞内ATP的生成。(6)BCECF-AM结果显示:FFJ-5可呈浓度依赖性地使A549和HepG2细胞中pH值降低。(7)罗丹明123染色结果显示:FFJ-5可呈浓度依赖性地促使A549和HepG2细胞线粒体膜电位降低。(8)Western blot结果显示:FFJ-5在A549、HepG2细胞中,可激活Caspase3,使Cleaved-Caspase3表达升高、导致PARP加速水解,Cleaved-PARP蛋白表达呈现浓度依赖性地升高。结论:(1)FFJ-5可显著抑制A549和HepG2细胞的生长和增殖,使细胞阻滞在G2/M期,并呈浓度依赖性。(2)FFJ-5可下调PKM2蛋白表达,影响肿瘤细胞的能量代谢和肿瘤细胞生长的酸性微环境。(3)FFJ-5可通过EGFR-Akt-PKM2信号通路抑制肿瘤的增殖并诱导肿瘤凋亡。
【关键词】：FFJ-5 抗肿瘤 细胞增殖 细胞凋亡
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一章 引言10-16
• 第二章 FFJ-5 的体外抗肿瘤活性研究16-30
• 2.1 实验材料16-19
• 2.1.1 细胞株16
• 2.1.2 主要仪器16-17
• 2.1.3 药品和试剂17-18
• 2.1.4 试剂配置方法18-19
• 2.1.5 药品配置方法19
• 2.2 实验方法19-21
• 2.2.1 细胞培养19
• 2.2.2 MTT法检测细胞生长活力19-20
• 2.2.3 流式细胞术检测细胞周期20-21
• 2.2.4 Hoechst33342/PI双染法检测细胞凋亡21
• 2.2.5 统计学分析21
• 2.3 实验结果21-27
• 2.3.1 FFJ-5 抑制肿瘤细胞生长21-24
• 2.3.2 FFJ-5 阻滞细胞周期抑制肿瘤细胞增殖24-25
• 2.3.3 FFJ-5 诱导肿瘤细胞凋亡25-27
• 2.4 讨论27-28
• 2.5 小结28-30
• 第三章 FFJ-5 对EGFR-Akt-PKM2信号通路影响30-48
• 3.1 实验材料30-34
• 3.1.1 细胞株30
• 3.1.2 主要仪器30-31
• 3.1.3 药品和试剂31-32
• 3.1.4 试剂配置方法32-34
• 3.1.5 药品配置方法34
• 3.2 实验方法34-37
• 3.2.1 细胞培养34
• 3.2.2 ATP检测34-35
• 3.2.3 细胞内pH检测35-36
• 3.2.4 罗丹明123检测线粒体膜电位36
• 3.2.5 Western blot检测蛋白表达36-37
• 3.2.6 统计学分析37
• 3.3 实验结果37-45
• 3.3.1 FFJ-5 降低肿瘤细胞内EGFR/Akt蛋白表达及活性37-38
• 3.3.2 FFJ-5 降低肿瘤细胞内PKM2蛋白的表达38-39
• 3.3.3 FFJ-5 降低肿瘤细胞ATP的水平39-40
• 3.3.4 FFJ-5 降低肿瘤细胞内的pH40-42
• 3.3.5 FFJ-5 降低肿瘤细胞线粒体膜电位诱导细胞凋亡42-44
• 3.3.6 FFJ-5 调控凋亡蛋白表达44-45
• 3.4 讨论45-47
• 3.5 小结47-48
• 参考文献48-52
• 附录52-53
• 致谢53-54
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文54-55

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本文编号：1063783