芬太尼对海马学习记忆相关信号通路影响及临床应用实验

发布时间：2017-10-21 09:10

  本文关键词：芬太尼对海马学习记忆相关信号通路影响及临床应用实验

  更多相关文章： 芬太尼 学习记忆 水迷宫 Wistar大鼠 ERK/CREB通路

【摘要】：学习记忆过程是机体复杂的生理活动之一,大脑通过多种作用机制对其进行的调节,在这些机制中,相应蛋白和信号通路起到重要作用。而麻醉镇静剂在某种程度上会引起机体记忆的丧失,甚至引发记忆障碍类疾病。芬太尼作为一种人工合成的麻醉性镇痛药,属于μ阿片受体激动剂,因为其强效与速效,在临床中被普遍使用。迄今为止,镇静剂量的镇痛性麻醉药对学习记忆相关信号转导通路影响有何不同仍未有明确报道。本实验拟研究芬太尼在镇静剂量时短时对记忆的影响,明确他的作用机理有助于为今后正确应用该药提供依据。本实验以Wistar雄鼠为实验对象,将20只大鼠随机选取5只作为生理盐水(SL)对照组,其余为实验组。先进行大鼠水迷宫定位航行实验,历时五天,前四天每天训练4次,上下午各两次,每次训练90s。第五天,腹腔注射等剂量生理盐水和镇静剂量芬太尼20μg/kg(0.4mL/kg),分别于给药后10min、6h、24h操作上述过程,并记录大鼠寻找并且爬上平台的路线图及所需时间(潜伏期)。但由于注射药物后10min大鼠处于镇静状态,无法进行测试,故而注射药物10min后直接取海马备用,6h和24h进行上述操作,并记录数据。每次时间点水迷宫实验后立即取脑中海马于-80℃备用,通过Western Blot检测海马内ARC、CREB、p-CREB、ERK和p-ERK蛋白表达变化,通过RT-PCR检测海马内ARC、CREB、ERK mRNA的变化,来推测药物对ERK信号通路的影响。给药10min后,Arc蛋白表达与对照组无显著差异,CREB、p-CREB、ERK和p-ERK蛋白表达均有所升高;给药6h后,蛋白表达均较10min组有明显下降,且略低于对照组,但其中磷酸化ERK变化量小,且略高于对照组;给药24h后,蛋白表达水平除Arc外均与生理盐水(SL)对照组显著降低。同时,通过Real Time PCR的结果显示,CREB、ERK的mRNA在每个时段的变化趋势,与Western Blot中蛋白表达量基本相符,从而印证了实验结果。水迷宫实验证明大鼠单次注射注镇静剂量(20μg/kg)的芬太尼可从行为学角度体现对学习记忆的影响。Real-time PCR和Western blot检测相关蛋白水平,得出大鼠单次注射注镇静剂量的芬太尼,记忆相关基因表达降低,影响学习记忆。
【关键词】：芬太尼 学习记忆 水迷宫 Wistar大鼠 ERK/CREB通路
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R965
【目录】：

• 摘要8-9
• 英文摘要9-11
• 1 引言11-17
• 1.1 海马与学习记忆相关通路11-13
• 1.1.1 海马概述11
• 1.1.2 学习记忆相关通路概述11-12
• 1.1.3 ERK功能12
• 1.1.4 CREB功能与学习记忆12-13
• 1.1.5 Arc功能与学习记忆13
• 1.2 阿片类药物13
• 1.3 芬太尼13-15
• 1.3.1 芬太尼概述13-14
• 1.3.2 芬太尼物化性质14
• 1.3.3 芬太尼的临床应用14-15
• 1.3.4 芬太尼中枢作用机制15
• 1.4 行为学检测常用方法15-16
• 1.5 试验目的意义16-17
• 2 材料与方法17-26
• 2.1 实验材料17-19
• 2.1.1 实验动物17
• 2.1.2 实验器械17-18
• 2.1.3 实验药品与试剂18-19
• 2.2 实验方法19-24
• 2.2.1 大鼠水迷宫试验19
• 2.2.2 大鼠海马的提取19-20
• 2.2.3 RT-PCR检测20-23
• 2.2.4 Western Blot检测23-24
• 2.3 数据统计分析方法24-26
• 3 结果26-35
• 3.1 大鼠水迷宫检测结果26-27
• 3.2 Real-time PCR大鼠海马内学习记忆相关信号转导因子mRNA的表达水平27-30
• 3.2.1 大鼠海马内ARC mRNA的表达水平27-28
• 3.2.2 大鼠海马内ERK mRNA的表达水平28-29
• 3.2.3 大鼠海马内CREB mRNA的表达水平29-30
• 3.3 Western blot大鼠海马学内习内记忆相关信号转导因子的蛋白表达水平30-35
• 3.3.1 大鼠海马内ARC的表达水平30-31
• 3.3.2 大鼠海马内ERK的表达水平31
• 3.3.3 大鼠海马内CREB的表达水平31-32
• 3.3.4 大鼠海马内P-ERK的表达水平32-33
• 3.3.5 大鼠海马内P-CREB的表达水平33-35
• 4 讨论35-38
• 4.1 海马参与空间学习记忆35-36
• 4.2 芬太尼对大鼠海马学习记忆相关信号转导因子ARC表达水平的影响36-37
• 4.3 芬太尼对大鼠海马学习记忆相关信号转导通路ERK/CREB的影响37-38
• 5 结论38-39
• 致谢39-40
• 参考文献40-43
• 附录43-44
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文44

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