表达人抗凝血蛋白的猪内皮细胞与抗凝药物对人血小板聚集的影响

发布时间：2017-10-23 03:00

  本文关键词：表达人抗凝血蛋白的猪内皮细胞与抗凝药物对人血小板聚集的影响

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【摘要】：目的:凝血功能紊乱一直是困扰异种器官利用的关键因素。本实验观察表达人抗凝血蛋白的猪动脉血管内皮细胞(p AEC)与抗凝药物对人外周血中血小板聚集的影响,为克服异种移植中可能出现的血栓性微血管病(Thrombotic microangiopathy,TMA)与消耗性凝血病(Consumptive coagulopathy,CC)提供实验依据。方法:①抗凝血药物对血小板聚集的影响将抗凝药物(肝素、低分子肝素、水蛭素)浓度为1 IU/m L,5IU/ml加入到WT-p AEC中,通过血小板聚集检测仪,检测不同浓度的抗凝药物对血小板聚集的影响。②表达人抗凝血蛋白的猪动脉血管内皮细胞(p AEC)对人外周血血小板聚集的影响。a用流式细胞仪检测表达人抗凝血蛋白(α-1,3-半乳糖苷基因敲除[GTKO]、人类补体蛋白调节基因[CD46,CD55]、血栓调节蛋白基因[TBM]、内皮C蛋白受体基因[EPCR])的猪动脉血管内皮细胞中基因表达水平;b将转基因猪动脉血管内皮细胞分为GTKO-p AEC,GTKO/CD46/CD55-p AEC,GTKO/CD46/TBM-p AEC,GTKO/CD46/EPCR-p AEC四组,阳性对照组为野生型(WT-p AEC),阴性对照组为人动脉内皮细胞(h AEC);c通过血小板聚集检测仪,检测各种动脉内皮细胞对血小板聚集的影响。③表达人抗凝血蛋白的p AEC与抗凝药物共同作用时,对人血小板聚集的影响。将不同浓度的抗凝药物加入到效果最好的转基因p AEC中通过血小板聚集检测仪,检测其对血小板聚集的影响。结果:①抗凝药物(肝素、低分子肝素、水蛭素)都能抑制人外周血血小板聚集,1IU/ml的低分子肝素、水蛭素仅能部分抑制人血小板聚集(聚集率分别为15%、29%)。5IU/ml的低分子肝素、水蛭素与1IU/ml的肝素都几乎能完全抑制人血小板聚集(聚集率分别为3%、4%)。②表达人抗凝血蛋白的猪动脉血管内皮细胞GTKO-p AEC,GTKO/CD46/CD55-p AEC,GTKO/CD46/TBM-p AEC,GTKO/CD46/EPCR-p AEC对人外周血血小板聚集有抑制作用(聚集率分别为44%、39%、27%、33%),其中GTKO/CD46/TBM-p AEC的抑制效果最佳(27%)。③GTKO/CD46/TBM-p AEC与抗凝药物共同作用人血小板聚集,其聚集率可降至4%。结论:①抗凝药物(肝素、低分子肝素、水蛭素)都能抑制人外周血血小板聚集。②表达人抗凝血蛋白的猪动脉血管内皮细胞可以明显降低人血小板聚集率。③在抗凝药物存在的条件下,表达人抗凝血蛋白的猪动脉血管内皮细胞所引起的血小板聚集率可以降低至与人动脉血管内皮细胞产生的聚集率相类似水平。
【关键词】：转基因 血小板 血小板聚集 异种移植
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 第1章 绪论9-11
• 第2章 实验材料11-13
• 第3章 实验方法13-17
• 第4章 实验结果17-25
• 第5章 讨论25-29
• 第6章 结论29-31
• 参考文献31-39
• 附录39-41
• 文献综述41-49
• 作者攻读学位期间的科研成果49-50
• 附件50-76
• 致谢76

【共引文献】

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3 姚丹华;李幼生;黎介寿;;异种移植的研究进展[J];中国普外基础与临床杂志;2013年12期

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本文编号：1081253