甜菊醇酰基葡萄糖醛酸结合物介导的药物相互作用机制研究

发布时间：2017-10-29 00:28

  本文关键词：甜菊醇酰基葡萄糖醛酸结合物介导的药物相互作用机制研究

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【摘要】：莱鲍迪苷A(RA),是从甜叶菊的叶子中提取出来的一种糖苷,已经作为一类天然甜味剂广泛用于食品、保健品等日常饮食生活中。食用莱鲍迪苷A后,在肠道菌群的作用下水解生成其苷元甜菊醇,甜菊醇吸收进入血液循环,进一步发生葡萄糖醛酸化然后经尿液排泄排出体外。甜菊醇酰基葡萄糖醛酸结合物(SVAG)是人和大鼠服用RA后,在体循环中存在的主要形式。本文主要通过体内外方法,探讨SVAG与一些药物之间的相互作用。大鼠体内动力学研究表明,大鼠灌胃口服RA6小时后,SVAG逐渐达到最大血药浓度,并且发现肝脏中SVAG浓度远远高于血浆,肝-血浆比大于20倍。当大鼠给予抗生素处理后,胃肠道中β-葡萄糖苷酶和β-葡萄糖醛酸酶活性明显降低。结果显示,SVAG最大血药浓度(Cmax)和曲线下面积(AUC)都降低大于3倍,但是,抗生素处理并不会影响SVAG体内肝-血浆分布比值。最近有研究报道显示,吉非贝齐和氯吡格雷酰基葡萄糖醛酸结合物是CYP2C8代谢酶的时间依赖性抑制剂,于是考察SVAG对主要细胞色素P450代谢酶抑制作用影响。研究结果表明,SVAG不会对主要细胞色素P450酶,如CYP1A2、2C9、2C19、2D6和3A4产生抑制作用,但是会抑制CYP2C8代谢酶活性。进一步考察其抑制类型,SVAG可逆性抑制CYP2C8介导的紫杉醇6α-羟基化反应,但SVAG并不是CYP2C8的时间依赖性抑制剂。SVAG还能够在人肝微粒体和人源重组酶CYP2C8体系中,抑制CYP2C8介导的瑞格列奈3’-羟基化反应,抑制常数(Ki)分别为15.8μM和11.6μM。可是在大鼠肝微粒体中,SVAG并不能抑制CYP2C8活性。另外,当莱鲍迪苷A和瑞格列奈联合用药时,瑞格列奈大鼠体内血浆Cmax和AUC并没有显著变化。于是继续用数学静态模型考察SVAG与瑞格列奈人体内药物相互作用,数据显示,SVAG可能会影响瑞格列奈体内处置过程,影响瑞格列奈体内AUC。所以,当人体同时服用瑞格列奈和莱鲍迪苷A用于血糖控制时,SVAG可能会提高瑞格列奈体内暴露量,必须谨慎注意由此带来的低血糖症状。肾脏是参与药物和外源性物质排泄的主要器官,有机阴离子转运体(OATs)则主要位于肾近端小管基底膜上,对药物和外源性物质从血液中摄取排泄到尿液中起至关重要的作用。SVAG在人体中主要是经肾脏排泄排出体外,我们之前的实验研究表明SVAG是有机阴离子转运体3(OAT3)的底物。利用稳定转染人源OAT3基因的HEK293细胞株模型,研究显示丙磺舒能够抑制SVAG细胞摄取,半数抑制浓度(IC50)为4.95μM。在大鼠肾切片模型中,SVAG主动摄取曲线很好地符合米氏动力学方程,米氏常数(Km)值为368.1μM。SVAG肾摄取会被人源OATs抑制剂丙磺舒和硫酸-3-雌酮抑制。当莱鲍迪苷A和20 mg/kg丙磺舒联合用药时,SVAG大鼠体内动力学变化明显,SVAG大鼠体内血浆Cmax增加2.15倍,AUC0-2增加1.71倍。综上所述,肠道菌群对SVAG体内生成起非常重要的作用,OAT3调控SVAG肾摄取和尿排泄,并且该排泄途径能够被强抑制剂抑制。另外,SVAG能够中等强度、可逆性抑制CYP2C8活性。总而言之,当莱鲍迪苷A与瑞格列奈联合用药,用来控制血糖的时候,应谨慎避免同时服用像丙磺舒之类的OATs抑制剂药物,值得注意的是,肾功能障碍患者更应该谨慎注意莱鲍迪苷A与瑞格列奈的联合用药。
【关键词】：甜菊醇酰基葡萄糖醛酸结合物 无菌鼠模型 细胞色素P450 2C8 瑞格列奈 有机阴离子转运体3 药物药物相互作用
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R969.2
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-12
• 第一章 文献综述12-21
• 1.1 药物代谢12-13
• 1.2 酰基葡萄糖醛酸结合物生物活性13-16
• 1.3 酰基葡萄糖醛酸结合物对细胞色素CYP2C8代谢影响16-18
• 1.4 莱鲍迪苷A的吸收、分布、代谢与排泄18-19
• 1.5 研究目的与计划19-21
• 第二章 SVAG大鼠体内动力学21-31
• 2.1 引言21
• 2.2 实验方法21-24
• 2.2.1 药品与试剂21-22
• 2.2.2 仪器、色谱和质谱条件22-23
• 2.2.3 动物及动物饲养23
• 2.2.4 RA大鼠体内动力学23
• 2.2.5 肠道菌群影响RA大鼠体内动力学研究23-24
• 2.2.6 SVAG大鼠体内肝分布24
• 2.2.7 样品处理24
• 2.2.8 数据分析24
• 2.3 结果与讨论24-30
• 2.3.1 RA大鼠体内动力学24-26
• 2.3.2 肠道菌群水解酶活性测试26-27
• 2.3.3 肠道菌群对RA大鼠体内动力学影响研究27-29
• 2.3.4 SVAG大鼠体内肝分布29-30
• 2.4 结论30-31
• 第三章 SVAG对细胞色素P450体外抑制作用研究31-43
• 3.1 引言31
• 3.2 实验方法31-35
• 3.2.1 药品、试剂和仪器31-32
• 3.2.2 色谱和质谱条件32-33
• 3.2.3 溶液配制33
• 3.2.4 CYPs酶体外抑制33
• 3.2.5 SVAG对CYP2C8介导的紫杉醇代谢时间依赖性抑制33-34
• 3.2.6 SVAG对CYP2C8介导的紫杉醇代谢抑制类型34
• 3.2.7 3-羟基瑞格列奈在人肝微粒体、人源重组酶CYP2C8、大鼠肝微粒体代谢生成孵育体系优化34
• 3.2.8 SVAG对 3’-羟基瑞格列奈生成体外抑制34-35
• 3.2.9 SVAG对瑞格列奈整体清除体外抑制35
• 3.2.10 样品处理35
• 3.3 结果与讨论35-41
• 3.3.1 CYPs酶体外抑制35-36
• 3.3.2 SVAG对CYP2C8介导的紫杉醇代谢时间依赖性抑制36-37
• 3.3.3 SVAG对CYP2C8介导的紫杉醇代谢抑制类型37-38
• 3.3.4 3’-羟基瑞格列奈生成孵育体系优化38-39
• 3.3.5 SVAG对瑞格列奈体外代谢抑制作用39-41
• 3.4 结论41-43
• 第四章 OAT3介导的SVAG体外摄取相互作用研究43-50
• 4.1 引言43
• 4.2 实验方法43-46
• 4.2.1 药品、试剂与仪器43-44
• 4.2.2 KB、HBSS缓冲液配置44
• 4.2.3 制备大鼠肾切片44
• 4.2.4 肾切片摄取实验44-45
• 4.2.5 细胞培养45
• 4.2.6 稳定转染细胞株HEK293-h OAT3摄取抑制实验45
• 4.2.7 样品处理45
• 4.2.8 数据分析45-46
• 4.3 结果与讨论46-49
• 4.3.1 肾切片孵育体系优化46
• 4.3.2 肾切片抑制实验46-48
• 4.3.3 稳定转染细胞株HEK293-h OAT3摄取抑制48-49
• 4.4 结论49-50
• 第五章 SVAG参与的大鼠体内药物相互作用研究50-58
• 5.1 序言50
• 5.2 实验方法50-52
• 5.2.1 色谱和质谱条件50-51
• 5.2.2 SVAG与瑞格列奈大鼠体内药物相互作用51
• 5.2.3 静态数学模型模拟CYP2C8介导的药物相互作用51
• 5.2.4 SVAG与丙磺舒大鼠体内药物药物相互作用51-52
• 5.2.5 数据分析52
• 5.3 结果与讨论52-57
• 5.3.1 SVAG与瑞格列奈大鼠体内药物相互作用52
• 5.3.2 静态数学模型模拟CYP2C8介导的药物相互作用52-55
• 5.3.3 SVAG与丙磺舒大鼠体内药物相互作用55-57
• 5.4 结论57-58
• 第六章 SVAG谷胱甘肽加成物LC-MS/MS检测58-63
• 6.1 序言58
• 6.2 实验方法58-59
• 6.2.1 药品与试剂58
• 6.2.2 体外孵育样品中测定SVAG谷胱甘肽加成物（SV-SG）58
• 6.2.3 大鼠肝样本中测定SVAG谷胱甘肽加成物（SV-SG）58-59
• 6.3 结果与讨论59-62
• 6.3.1 SVAG谷胱甘肽加成物质谱断裂分析59
• 6.3.2 体外方法测定SVAG谷胱甘肽加成物59-61
• 6.3.3 大鼠肝脏中测定SVAG谷胱甘肽加成物61-62
• 6.4 结论62-63
• 第七章 总结/展望63-66
• 参考文献66-74
• 缩略语说明74-75
• 期刊论文发表75
• 个人简历75-76
• 致谢76-77

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