建立原代小鼠肝细胞体外模型用于致癌物作用机制研究

发布时间：2017-10-30 18:06

  本文关键词：建立原代小鼠肝细胞体外模型用于致癌物作用机制研究

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【摘要】：目的:建立药物非临床安全性评价致癌性试验原代小鼠肝细胞体外替代模型,以毒理基因组学方法对遗传毒性致癌物和非遗传毒性致癌物的潜在作用机制进行研究。方法:改良两步胶原酶灌流法分离C57BL/6小鼠肝细胞构建原代小鼠肝细胞三明治培养模型。原代小鼠肝细胞分别给予2个遗传毒性致癌物黄曲霉素B1(aflatoxin B1,AFB1)、苯并芘[benzo(a)pyrene,BAP]和2个非遗传毒性致癌物硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)、匹立尼酸(WY-14643,WY)共培养24h及48h后,使用Affymetrix公司小鼠转录组分析基因芯片1.0(GeneChip~?Mouse Transcriptome Assay 1.0)进行时间依赖差异表达基因分析。对差异表达基因使用基因功能(GO)富集分析,KEGG通路功能分析,主成分分析(PCA)和分层聚类分析(HCA)等进一步研究了致癌物可能的作用机制。结果:遗传毒性致癌物的差异表达基因的数量比非遗传毒性致癌物多。AFB1和BAP虽然影响化学性致癌通路和上调p53信号通路,但其致癌途径有一定差异。TAA影响氧化还原酶活性,可能造成氧化损伤。WY显著上调过氧化物酶体增殖物激活受体和脂肪合成与代谢通路,可能造成细胞内脂质代谢紊乱。通过延长致癌物暴露时间能得出更多信息用于进一步分析。结论:成功建立了原代小鼠肝细胞三明治体外模型,可用于研究遗传毒性致癌物和非遗传毒性致癌物的作用机制,有望作为药物非临床安全性评价致癌性试验体外替代候选模型之一。
【作者单位】： 中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心药物非临床安全评价研究北京市重点实验室;中山大学药学院药物安全性评价中心;中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所;中国食品药品检定研究院;
【关键词】： 毒理基因组学 小鼠原代肝细胞体外模型 致癌性试验 三明治模型 遗传毒性致癌物 非遗传毒性致癌物 药物非临床安全性评价
【基金】：科技部“十二五”重大新药创制专项课题(2012ZX09302001)资助项目
【分类号】：R965
【正文快照】： 药物非临床安全性评价直接关系到患者的用药安全,是新药研发中至关重要的环节,致癌性试验是药物非临床安全性评价的重要内容。化学致癌作用是多阶段的过程,包括起始、促进、进展等阶段[1]。化学致癌物根据其作用机制分为遗传毒性致癌物和非遗传毒性致癌物。遗传毒性致癌物在细

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