CMKLR1配体特异性内吞机制及β淀粉样蛋白对正位激动剂chemerin C9的双相调控

发布时间：2017-10-31 22:34

  本文关键词：CMKLR1配体特异性内吞机制及β淀粉样蛋白对正位激动剂chemerin C9的双相调控

  更多相关文章： β淀粉样蛋白 CMKLR1 内吞 钙流 ERK磷酸化

【摘要】：趋化因子类似物受体1(CMKLR1,ChemR23)是一类具有七次跨膜结构的G蛋白偶联受体,可以与chemerin及其衍生的九肽(C9)结合发挥细胞功能。近期有研究发现淀粉样蛋白β的1-42位肽段同样可以与CMKLR1结合。鉴于CMKLR1的不同配体不存在序列同源性,我们拟通过使用稳定表达CMKLR1的细胞系来探究它们作用于CMKLR1的药理效应。Aβ42和C9与CMKLR1结合后都可以引起受体的内吞现象,但是只有Aβ42引起的内吞现象依赖网格蛋白包被的内吞小泡。同样Aβ42可以刺激β-arrestin 2上膜而C9无法引起相同的现象。C9刺激CMKLR1可以引起很强的钙响应值而Aβ42即使在很高浓度(微摩尔级)也无法引起钙流。Aβ42可以调控C9引起的钙流现象,Aβ42浓度为100 p M时表现为增强作用,10 nM时表现抑制作用,而在1μM时又反转为增强作用。在钙流实验中表现的双相调控作用同样存在于C9引起的ERK磷酸化作用中,但是作用效应相反。综合上述实验结果,我们发现Aβ42和C9对CMKLR1的调控方式不同,这类调控很可能是通过对不同信号通路的偏向性激活以及受体构象改变来实现的。
【关键词】：β淀粉样蛋白 CMKLR1 内吞 钙流 ERK磷酸化
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 符号说明10-11
• 第一章 绪论11-14
• 1 研究背景11-12
• 2 选题意义和研究内容12-14
• 2.1 选题意义12-13
• 2.2 研究内容13-14
• 第二章 CMKLR1稳定转染细胞株的构建14-31
• 1 材料和仪器14-16
• 1.1 原料与试剂14-15
• 1.2 仪器和设备15
• 1.3 溶液配制15-16
• 1.4 质粒16
• 2 实验方法16-27
• 2.1 质粒构建16-21
• 2.2 感受态细菌制备21-22
• 2.3 质粒的转化、扩增与鉴定22-23
• 2.4 质粒抽提23-25
• 2.5 稳定转染细胞株的构建25-26
• 2.6 免疫荧光26-27
• 3 实验结果27-29
• 3.1 质粒CMKLR1- pcDNA3.1+表达的检验27-28
• 3.2 293细胞分别稳转质粒CMKLR1-EGFP-pcDNA3.1+和FPR2-EGFP- pcDNA3.1+28-29
• 4 讨论29
• 5 小结29-31
• 第三章 Chemerin C9和Aβ_(42)分别诱导CMKLR1内吞31-62
• 1 材料和仪器31-34
• 1.1 原料与试剂31-32
• 1.2 仪器和设备32-33
• 1.3 溶液配置33-34
• 1.4 质粒34
• 1.5 细胞34
• 2 实验方法34-44
• 2.1 细胞培养与传代34-35
• 2.2 细胞复苏与冻存-慢冻快融35-36
• 2.3 瞬时转染36-37
• 2.4 细胞计数37-38
• 2.5 流式细胞术38-41
• 2.6 免疫荧光41-42
• 2.7 细胞迁移42-44
• 3 实验结果44-60
• 3.1 C9诱导CMKLR1内吞44-54
• 3.2 Aβ_(42)诱导CMKLR1受体内吞54-60
• 4 讨论60-62
• 5 小结62
• 第四章 配体之间的相互调控作用62-83
• 1 材料和仪器63-65
• 1.1 原料与试剂63-64
• 1.2 仪器和设备64
• 1.3 溶液配置64-65
• 1.4 质粒65
• 1.5 细胞65
• 2 实验方法65-69
• 2.1 钙流65-67
• 2.2 蛋白免疫印迹法67-69
• 3 实验结果69-81
• 3.1 Aβ_(42)对C9刺激CMKLR1所产生钙流的调控作用69-73
• 3.2 C15对C9刺激CMKLR1所产生钙流的调控作用73-75
• 3.3 Aβ_(42)对WKYMVm刺激FPR2所产生钙流的调控作用75-78
• 3.4 Aβ_(42)对C9刺激CMKLR1所引起ERK磷酸化的调控作用78-79
• 3.5 Aβ_(42)调控钙流与ERK磷酸化变化趋势的对比79-81
• 4 讨论81-82
• 5 小结82-83
• 第五章 总结与展望83-85
• 参考文献85-89
• 致谢89-90
• 攻读硕士期间的主要研究成果90
• 基金资助项目90-92

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