以Neprilysin为靶点的药物筛选模型的建立及应用

发布时间：2017-11-20 18:36

  本文关键词：以Neprilysin为靶点的药物筛选模型的建立及应用

  更多相关文章： NEP 靶点 毕赤酵母 抑制剂 药物筛选

【摘要】：尽管现在的医疗诊断和管理水平都有显著提高,但全球人民的健康和心血管疾病(cardiovascular disease, CVD)尤其是高血压和心力衰竭造成的社会经济负担,仍然是一个严重的公共卫生问题。研究发现在心力衰竭动物模型中,肾脏中的Neprilysin(NEP)蛋白含量增加,活性及表达上调。NEP (EC 3.4.24.11)是中性内肽酶,也称脑啡肽酶,是一种位于细胞膜表面的Ⅱ型含锌跨膜金属蛋白酶,主要的生理功能是水解肽链氨基端疏水氨基酸残基。NEP对调节血压的肽类物质,如利钠肽(natriuretic peptide, NP),缓激肽(Bradykinin, BK),内皮素等具有降解作用,抑制NEP能增加这些血管活性肽的活性,因此NEP成为治疗心血管疾病的一个重要靶点。本课题主要目的是通过建立以NEP为靶标的高通量筛选模型,并应用该模型筛选可以作为先导化合物的抑制剂。利用毕赤酵母表达系统,构建重组质粒pPICZα-A-NEP,表达载体通过与酵母菌X-33基因组染色体发生同源重组,将外源基因整合于染色体后实现目的蛋白的表达,表达的蛋白通过Ni2+-NTA亲和层析进行分离纯化,以此得到纯度较高的NEP目的蛋白。应用荧光共振能量转移法(FRET)检测蛋白酶活性,优化反应条件,建立药物筛选体系。应用建立的药物筛选体系筛选了784种化合物和2000种天然产物分段组分,筛选到2种抑制效果较好的化合物,并测定了这2种化合物的ICso值,其中编号为MDCR02的ICso为101.3 μmol/L,编号为MDCR04的ICso为0.494 μmol/L;筛选到8种抑制率大于90%的天然产物分段组分,通过进行梯度稀释比较抑制效果,最后得到两种抑制效果相对较好的组分,分别是MDCNCL01000241, MDCNCL01000242, IC50值均在10μg/mL以下。这些先导药物的发现有助于针对NEP开发新药。
【学位授予单位】：天津科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R91

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本文编号：1208095