艾塞那肽对高糖诱导的心肌细胞抗炎作用机制的探讨

发布时间：2017-12-12 14:00

  本文关键词：艾塞那肽对高糖诱导的心肌细胞抗炎作用机制的探讨

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【摘要】：目的:用高糖刺激原代心肌细胞来模拟糖尿病时持续的高血糖对心肌细胞的损伤,用艾塞那肽处理后来观察高糖环境下的心肌细胞内的炎症因子水平,SIRT1、p-38、NF-κB蛋白的表达情况,探讨艾塞那肽是否对高糖导致的心肌细胞的损伤有保护作用以及其可能的机制。方法:1.乳鼠心肌细胞的分离、培养与实验分组:原代心肌细胞培养48h后,首度换液后,再培养至细胞80%-90%融合时,将细胞分为五组:正常组(含5.5mmol/L D-Glucose的DMEM),模型组(DMEM+24.5mmol/L的D-Glucose,即30mmol/L的HG溶液),小剂量组(10nmol/L的exendin-4),大剂量组(20nmol/L的exendin-4),对照组(DMEM+24.5mmol/L的D-Mannitol);大剂量组与小剂量组的药物均用30mmol/L的葡萄糖溶液配制。各组细胞均培养24h后收集细胞培养液上清液及细胞。2.指标检测:用ELISA试剂盒检测炎症因子IL-6,TNF-α的含量,western blot检测SIRT1,p-p38,NF-κB蛋白的表达,RT-PCR来检测SIRT1m RNA的表达。结果:1.炎症因子IL-6,TNF-α的含量:高糖可以诱导心肌细胞中的炎症因子IL-6,TNF-α的含量增加(p0.01,p0.01),给予艾塞那肽处理后,心肌细胞内IL-6(p0.05,p0.05),TNF-α(p0.05,p0.01)的含量显著减少,说明艾塞那肽能减轻炎症因子的产生;2.p-p38蛋白的表达:高糖可以使心肌细胞中的p-p38蛋白的表达上调(p0.01),给予艾塞那肽后,p-p38蛋白表达显著减少(p0.05,p0.05);3.NF-κB蛋白的表达:与正常组相比,高糖组的NF-κB p65的表达明显增加(p0.05),给予艾塞那肽后,NF-κB p65的蛋白表达量明显低于高糖组(p0.05);4.SIRT1m RNA和蛋白的表达:在高糖的刺激下,心肌细胞内的SIRT1m RNA(p0.05)和蛋白(p0.05)的表达均下调,给予艾塞那肽后,SIRT1m RNA(p0.05,p0.05)和蛋白(p0.05,p0.01)的表达与高糖组相比明显升高。结论:1.艾塞那肽对高糖诱导的心肌细胞的损伤有保护作用,能减少炎症因子的产生;2.艾塞那肽对高糖诱导的心肌细胞的损伤的保护作用机制可能是通过下调p-p38,NF-κB p65蛋白的表达,上调SIRT1的表达。
【学位授予单位】：湖北科技学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96

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本文编号：1282734