EGCG全酰化衍生物体外降解及对环磷酰胺引起的肝毒性的保护作用

发布时间：2017-12-31 23:31

本文关键词：EGCG全酰化衍生物体外降解及对环磷酰胺引起的肝毒性的保护作用　出处：《西南大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是一种主要存在于茶叶中的多酚类化合物,具有抗氧化、清除自由基、抗炎、抗菌、抗光学损伤、抗肿瘤、抗HIV、调节代谢综合症、预防心血管疾病、预防神经退行性病变等多种生理活性。但是由于其脂溶性及稳定性差,生物利用度低等缺点,使其使用受到限制。近年来,国内外开展了EGCG改性的相关研究,以期改善EGCG的应用特性。本研究制备了一系列EGCG酰化衍生物(全乙酰化EGCG、全丙酰化EGCG、全丁酰化EGCG、全己酰化EGCG、全辛酰化EGCG、全癸酰化EGCG和全苯甲酰化EGCG),主要对全乙酰化EGCG、全丙酰化EGCG和全丁酰化EGCG在人工模拟胃肠液中的稳定性、在小鼠肝微粒体中的降解及它们对环磷酰胺引起的肝损伤的保护作用做了研究,具体内容如下:(1)全酰化EGCG衍生物制备本研究以酸酐或酰氯为酰化试剂,以N,N-二甲氨基吡啶(DMAP)或吡啶为催化剂,TLC监测反应程度。反应完全后,依次用蒸馏水、饱和NaHCO3溶液、蒸馏水洗涤,所得有机层用无水MgSO4干燥,旋蒸除去溶剂。所得粗产物采用硅胶柱层析法进行分离,得到一系列高纯度的全酰化的产物。合成的产物通过MS、1H NMR、13C NMR等手段确认为相应的衍生物。(2)EGCG酰化衍生物的稳定性及降解特性本研究对EGCG及全乙酰化、全丙酰化、全丁酰化的EGCG在人工模拟胃肠液中的稳定性进行了对比,和这三种酰化衍生物在小鼠肝微粒体中的降解特性做了研究。采用HPLC法测定这三种衍生物在模拟胃肠液和微粒体体外代谢系统中的含量,比较EGCG及其三种衍生物在模拟胃肠液的稳定性,利用底物消除法计算这三种衍生物的酶促动力学参数Km和Vmax。结果表明,在人工模拟胃液中,EGCG及其衍生物均能保持一定的稳定性;在人工模拟肠液中,EGCG迅速发生变化,在本实验条件下几乎检测不到。三种衍生物的稳定性相比于EGCG明显提高,稳定性由强到弱依次为BuEGCGPrEGCGAcEGCG。EGCG三种全酰化衍生物在小鼠肝微粒体中的降解实验表明,AcEGCG的Km=0.2098 mmol·L~(-1)、Vmax=4.7484μmol·min~(-1)·mg~(-1);PrEGCG的Km=0.2155 mmol·L~(-1)、Vmax=3.3546μmol·min~(-1)·mg~(-1);BuEGCG的Km=0.3303 mmol·L~(-1)、Vmax=0.5063μmol·min~(-1)·mg~(-1)。随着酰基碳链的延长,降解速度逐渐减慢,肝内清除率逐渐降低。(3)对环磷酰胺引起的肝毒性的保护作用本研究采用环磷酰胺对昆明小鼠造模,引起肝脏损伤,观察EGCG及其全乙酰化、全丙酰化、全丁酰化的衍生物对环磷酰胺引起的肝毒性的保护作用。实验设置对照组、环磷酰胺组、EGCG及其衍生物(AcEGCG、PrEGCG、BuEGCG)低、高剂量组,第1-9天灌胃给予药物,第10天(除对照组外)腹腔注射环磷酰胺。采用全自动生化分析仪测定小鼠血清生化酶(AST、ALT、LDH)指标,采用试剂盒测定肝脏组织匀浆中的MDA、GSH量和SOD、CAT、GSH-PX活性,并观察肝脏组织病理学变化。结果表明,与环磷酰胺组比较,EGCG的高剂量、三种衍生物的低、高剂量组小鼠血清中AST、ALT、LDH活性明显下降,组织中SOD、CAT、GSH-PX活性升高,MDA含量下降,GSH含量升高。环磷酰胺组小鼠肝脏出现变性坏死、凋亡及炎性细胞浸润等病理变化,而EGCG及其三种衍生物的低、高剂量组大鼠肝脏病理变化不同程度减轻。EGCG及其衍生物对环磷酰胺致小鼠肝脏毒性具有一定保护作用。结论:EGCG经酰化修饰后,在人工模拟胃肠液中的稳定性提高,肝内清除率降低,降低首过效应,有助于提高口服生物利用度。对EGCG及其三种衍生物的对环磷酰胺引起的肝毒性的保护作用研究发现,EGCG酰化衍生物的肝保护作用相比EGCG增强。
[Abstract]:In recent years , a series of studies on the stability and the protective effect of all - acetylated egcg , all - acrylated egcg , whole - butylation egcg , total hexacylates egcg , total - octanolated egcg , total decylacylated egcg and full - benzoylated egcg have been carried out . ( 2 ) The stability and degradation characteristics of three kinds of derivatives were studied by HPLC . The results showed that the stability of the three kinds of derivatives in rat liver microsomes was studied . The results showed that the Km = 0.2098 mmol 路 L ~ ( -1 ) , Vmax = 4.7484 渭mol 路 L ~ ( -1 ) 路 mg ~ ( -1 ) , Vmax = 3.3546 渭mol 路 L ~ ( -1 ) 路 mg ~ ( -1 ) , Vmax = 0.5063 渭mol 路 min ~ ( -1 ) 路 mg ~ ( -1 ) . The protective effects of cyclophosphamide on liver toxicity induced by cyclophosphamide in mice induced by cyclophosphamide were studied . The results showed that the levels of AST , ALT and LDH in liver tissue homogenate were significantly decreased . The levels of SOD , CAT , GSH - PX , CAT , GSH - PX in liver tissues were significantly decreased .

【学位授予单位】：西南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R965

【相似文献】