转铁蛋白-PEG-睫状神经营养因子的制备及其生物活性评价

发布时间：2018-01-01 12:40

  本文关键词：转铁蛋白-PEG-睫状神经营养因子的制备及其生物活性评价　出处：《中国生物工程杂志》2016年04期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：为了实现在体内更持久的药效作用,根据睫状神经营养因子CNTF第17位为游离半胱氨酸残基,而转铁蛋白Tf无游离半胱氨酸的特点,采用N-羟基琥珀酰亚胺-聚乙二醇5K-马来酰亚胺(NHS-PEG5k-MAL)作为偶联剂,实现了两者定点偶联,然后结合蛋白自身特性制定纯化方法,制备获得纯度高于90%的转铁蛋白-聚乙二醇5k-睫状神经营养因子(Tf-PEG5k-CNTF)耦合物。高效凝胶色谱和动态光散射分析显示耦合物的表观分子体积大于两蛋白之和。细胞试验结果显示耦合物的活性下降至原蛋白的65.8%。大鼠药代动力学试验显示Tf-PEG5k-CNTF耦合物在体内的代谢半衰期延长至8.2小时,与CNTF原蛋白相比提高了约17倍。小鼠动物试验显示在每周2次的给药频率,每次1.0 mg/kg的剂量下,Tf-PEG5k-CNTF能更为显著地影响小鼠对食物摄入量和减轻体重。因此,转铁蛋白偶联技术可用于脑部靶向蛋白药物的长效递送。
[Abstract]:In order to achieve a more lasting effect in vivo, ciliary neurotrophic factor (CNTF) is the 17th free cysteine residue, while transferrin TF has no free cysteine. N- hydroxysuccinimide-polyethylene glycol 5K- Maleimide (NHS-PEG5k-MAL) was used as the coupling agent to realize the fixed-point coupling. Then, the purification method was developed by combining the characteristics of the protein. Preparation of transferrin with purity above 90%-polyethylene glycol 5k- ciliary neurotrophic factor Tf-PEG5k-CNTFs. Couplings. High performance gel chromatography and dynamic light scattering analysis showed that the apparent molecular volume of the coupling was greater than the sum of the two proteins. Cell tests showed that the coupling activity decreased to 65.8 percent of the original protein. The pharmacokinetic activity of the coupling was 65.8 percent of the original protein. Mechanical tests showed that the metabolic half-life of Tf-PEG5k-CNTF couplings in vivo was prolonged to 8.2 hours. Compared with CNTF proto protein, it was increased by about 17 times. Mice were given twice a week at a dose of 1.0 mg/kg. Tf-PEG5k-CNTF can significantly affect food intake and weight loss in mice. Therefore, transferrin coupling technique can be used for long-term delivery of brain targeted protein drugs.
【作者单位】： 四川大学华西药学院靶向药物及释药系统教育部重点实验室;中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室;北京生物制品研究所;
【基金】：教育部博士点基金(120120181110036) 国家自然科学基金(21576267)资助项目
【分类号】：R943
【正文快照】： 睫状神经营养因子( ciliary neuronotrophic factor,CNTF) 是上世纪80 年代由Barbin等[1]从鸡胚的睫状神经节中提取的一种多功能细胞因子。早期的研究认为它是一种可促进睫状神经元和脊髓中运动神经元存活的营养因子,但在随后的临床研究出乎意料地发现其具减轻个体体重的活性

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