二甲双胍通过P53-IFI16-AMPK通路抑制原代人主动脉平滑肌细胞的增殖和迁移

发布时间：2018-01-13 16:41

本文关键词：二甲双胍通过P53-IFI16-AMPK通路抑制原代人主动脉平滑肌细胞的增殖和迁移　出处：《贵州医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:平滑肌细胞的增殖和迁移对于血管动脉粥样硬化的发生和发展以及斑块的破裂具有重要意义。二甲双胍作为一种广泛应用于临床的降糖药,据报道它能够抑制细胞的增殖和迁移。本文通过体外实验探寻二甲双胍对原代人主动脉平滑肌细胞增殖和迁移的影响,并阐明其分子机制。方法:选取2组不同代数的原代人主动脉平滑肌细胞(第三代和第七代),通过β半乳糖苷酶染色、细胞计数、CCK-8、细胞周期和细胞Transwell检测这两组不同代数细胞的衰老、增殖和迁移能力;通过western blot检测这两组细胞中P53、IFI16、AMPK和P-AMPK的蛋白表达水平;通过细胞免疫荧光检测这两组细胞中P53和IFI16的内源性表达水平。分别用不同浓度的二甲双胍(0,2,5,10 mmol/l)刺激第三代的平滑肌细胞24小时,通过RT-PCR检测四组细胞中P53和IFI16的mRNA水平,通过western blot检测四组细胞中P53、P-P53(Ser-15)、IFI16、AMPK和P-AMPK的蛋白表达水平;并通过细胞计数、CCK-8、细胞周期和细胞Transwell检测这四组细胞的增殖和迁移能力。取第三代平滑肌细胞分别转染阴性对照小干扰RNA(control siRNA)和P53小干扰RNA(P53 siRNA),设未处理组(Untreated group),阴性对照组(Control siRNA group)和P53小干扰组(P53 siRNA group),通过RT-PCR和western blot检测P53,IFI16和AMPK的表达水平;在P53小干扰RNA转染后的细胞中加入二甲双胍(10mmol/l)刺激24小时,通过细胞计数、CCK-8、细胞周期和细胞Transwell再次评估二甲双胍对P53干扰后平滑肌细胞增殖和迁移的影响。同样取第三代平滑肌细胞分别转染阴性对照小干扰RNA(control siRNA)和IFI16小干扰RNA(IFI16 siRNA),设未处理组(Untreated group),阴性对照组(Control siRNA group)和IFI16小干扰组(IFI16 siRNA group),通过RT-PCR和western blot检测P53,IFI16和AMPK的表达水平;在IFI16小干扰RNA转染后的细胞中加入二甲双胍(10 mmol/l)刺激24小时,通过细胞计数、CCK-8、细胞周期和细胞Transwell再次评估二甲双胍对IFI16干扰后平滑肌细胞增殖和迁移的影响。在分别转染P53小干扰RNA和IFI16小干扰RNA的细胞中加入二甲双胍(10mmol/l)刺激24小时,通过western blot检测P53,P-P53(Ser-15),IFI16,AMPK和P-AMPK的表达水平。结果:衰老的平滑肌细胞(第七代)呈现增殖和迁移能力的减弱,其中P53,IFI16,AMPK和P-AMPK的蛋白表达水平明显增加。二甲双胍通过激活P53,IFI16和AMPK的表达抑制平滑肌细胞的增殖和迁移。P53和IFI16干扰后能引起AMPK表达的降低,同时能明显地逆转二甲双胍在平滑肌细胞中的抑制作用。在P53和IFI16干扰的平滑肌细胞中,二甲双胍并不能激活AMPK的表达。结论:二甲双胍通过P53-IFI16-AMPK通路抑制原代人主动脉平滑肌细胞的增殖和迁移。这些研究结果提示二甲双胍具有抗动脉粥样硬化的潜力。
[Abstract]:The effects of metformin on proliferation and migration of P53 , IFI16 , AMPK and P - AMPK were detected by RT - PCR and Western blot . The effects of metformin on proliferation and migration of P53 , IFI16 , AMPK and P - AMPK were detected by Western blot . The expressions of P53 , IFI16 , AMPK and P - AMPK were detected by Western blot . The results showed that metformin did not activate the expression of P53 , P - P53 ( Ser - 15 ) , IFI16 , AMPK and P - AMPK .

【学位授予单位】：贵州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R96

【参考文献】