利用荧光素酶报告基因检测维生素D生物活性

发布时间：2018-01-21 13:24

本文关键词： 维生素D 荧光素酶报告基因活性测定药物筛选体外检测模型　出处：《药物分析杂志》2017年07期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的:为维生素D生物活性或类维生素D活性的药物筛选建立体外检测模型。方法:利用分子生物学技术构建了含有荧光素酶报告基因的载体。PCR扩增CYP24A1启动子上下游区域,并插入到含有红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)和荧光素酶报告基因(luciferase reporter gene)的p RP-RFP-luciferase载体中。经PCR、双酶切和测序鉴定后,转染至Hela细胞,以RFP的表达反映转染效率,荧光素酶的活性水平反映维生素D药物活性的强弱。结果:经鉴定,构建的荧光素酶报告基因载体转染Hela细胞后有红色荧光表达,荧光素酶报告基因检测可有效反映1,25(OH)_2D_3生物活性。结论:在体外细胞水平上,利用荧光素酶报告基因检测维生素D生物活性的方法简单可行,为后续筛选和研发具有维生素D活性的药物奠定基础。
[Abstract]:Objective: to establish an in vitro assay model for the screening of vitamin D bioactivity or vitamin D like activity. A vector containing luciferase reporter gene was constructed by molecular biology to amplify the upstream and downstream region of CYP24A1 promoter. And inserted into red fluorescent protein containing red fluorescent protein. In p RP-RFP-luciferase vector of luciferase reporter gene and luciferase reporter gene. After double enzyme digestion and sequencing, transfected into Hela cells, the transfection efficiency was reflected by the expression of RFP, and the activity level of luciferase reflected the strength of vitamin D drug activity. The luciferase reporter gene vector was transfected into Hela cells and expressed in red. The detection of luciferase reporter gene can effectively reflect 1. Conclusion: the method of detecting vitamin D bioactivity by luciferase reporter gene in vitro is simple and feasible. It lays the foundation for screening and developing drug with vitamin D activity.
【作者单位】：陕西理工大学维生素D生理与应用研究所;
【基金】：汉中市科技局项目(No.2014ZKC47-07) 陕西理工学院博士启动项目(SLGQD13(2)-22) 陕西省科技创新团队项目(2012KCT-29)
【分类号】：R927.1
【正文快照】： 在药物筛选领域,报告基因技术已经成为一种重要的研究工具,其利用药物处理细胞后报告基因的表达情况来反映药物的活性[1]。报告基因技术是把报告基因的编码序列与特定的顺式调控序列连接形成重组基因,在调控序列控制下进行表达,从而可直观地反应细胞内与基因表达有关的信号级

【参考文献】