不溶性血小板膜颗粒的制备及功能研究

发布时间：2018-03-03 03:19

  本文选题：血小板颗粒　切入点：止血　出处：《北京协和医学院》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：利用过期的手工汇集的血小板来制备不溶性血小板膜(Infusible platelet membrane, IPM)颗粒,并初步探索IPM颗粒的止凝血功能。 方法：从采供血机构获得的过期浓缩血小板经过差速离心去除红细胞、白细胞和血浆,用生理盐水悬浮,放入-70℃5小时(冻)、25℃恒温水浴温育2小时(融),反复三次冻融破碎血小板。经冻融破碎的血小板经离心洗涤除去破碎细胞所释放的内容物。随后,进行超声匀浆200个循环(2S,占空比1.4：0.6),获得大小较均一的IPM颗粒,保存于4℃。对其进行理化和功能检测：使用纳米颗粒分析仪测量IPM颗粒大小,扫描电镜观察颗粒形态,采用SDS-PAGE电泳鉴定IPM颗粒与血小板的蛋白条带的差异,使用流式细胞术检测IPM颗粒表面的糖蛋白受体,利用化学发光的方法来检测IPM颗粒凝血酶生成能力,最后通过流式细胞仪术检测IPM颗粒对血小板聚集诱导剂的聚集反应性。结果：通过冻融和超声相结合的方法制备的IPM颗粒大小为150rnm左右,圆形；电泳条带显示IPM颗粒与血小板蛋白条带的差异主要在分子量200-85KDa之间；表面含有糖蛋白GP Ⅰ bα (CD42b)、糖蛋白GP Ⅱb-Ⅲa (CD41/CD61)、血小板内皮细胞粘附分子(CD31)、P-选择素(CD62p);体外功能实验结果表明,IPM颗粒在瑞斯托霉素(Ristocetin)和Ⅲ型胶原(Collagen-Ⅲ)诱导下能发生聚集。凝血酶生成实验证实,IPM能为凝血因子X酶复合物(Tenase complex)和凝血酶生成提供催化表面,参与凝血级联反应。结论：本研究采用冻融和超声相结合的方法,能够制备得到大小均一的IPM颗粒,颗粒表面保留了与止血功能相关的蛋白受体GP Ⅰ bα GP Ⅱb-Ⅲa, CD31和CD62p。在血小板聚集诱导剂的刺激下IPM颗粒可以发生聚集反应,初步表现为止血功能,根据本课题的研究结果,预测IPM颗粒有望成为一种新的止血剂。
[Abstract]:Aim: to prepare insoluble platelet membrane (IPM) granules by using expired hand collected platelets and to explore the anticoagulant function of IPM granules. Methods: the expired concentrated platelets obtained from the blood collection and supply institutions were separated by differential centrifugation to remove red blood cells, white blood cells and plasma, and were suspended with normal saline. Put in -70 鈩，

本文编号：1559325