盐酸奥布卡因与氧氟沙星对人角膜上皮细胞的凋亡诱导作用研究

发布时间：2018-03-18 11:04

本文选题：盐酸奥布卡因　切入点：氧氟沙星　出处：《中国海洋大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：随着医药技术的不断发展，目前临床上可供选择的眼科用药越来越多，随着角膜感染的抗菌药物、抗病毒药物以及用于手术中的麻醉剂药物等的广泛应用，为临床治疗提供了多种选择机会，而眼科药物的毒性作用已引起临床用药者的高度重视并成为医药领域的研究课题。大部分的眼科药物是通过眼表给药的，极有可能首先会对角膜产生毒副作用，更甚者，可能会致盲。而角膜上皮作为角膜最外层，是防御外界致病因子侵犯的物理屏障，其结构的完整性决定了角膜执行正常的生理功能。因此，研究药物对于人角膜上皮细胞（HCEP）的影响对于制定安全的临床给药方案，建立科学的新药研究模式以及筛选高效、低毒的眼科药物具有重要的科学意义和应用价值。到目前为止，尚未见常用表面麻醉剂盐酸奥布卡因与喹诺酮类抗菌药氧氟沙星对人角膜上皮细胞的毒副作用报道，本文以实验室自建的非转染、无致瘤性的HCEP细胞系为研究体系，研究了盐酸奥布卡因与氧氟沙星对HCEP细胞的凋亡诱导作用。本文分别将临床浓度为4g/L的盐酸奥布卡因倍比稀释至0.125g/L，临床浓度为3g/L的氧氟沙星倍比稀释至0.1875g/L，对体外培养的HCEP细胞加药处理，通过倒置显微镜观察细胞的状态、MTT检测细胞的活性，结果表明，盐酸奥布卡因和氧氟沙星分别在0.5~4g/L和1.5~3g/L的浓度范围内能够引起HCEP细胞的毒副作用，通过流式细胞仪研究其细胞周期变化，结果显示1g/L盐酸奥布卡因与3g/L氧氟沙星均使HCEP细胞周期发生了S期阻滞，为进一步研究这两种药物的毒副作用机理，通过AO/EB荧光双染色法检测细胞的凋亡率、Annexin V/PI观察细胞凋亡情况、凝胶电泳检测DNA断片化、以及透射电镜观察细胞的超微结构，结果表明，这两种药物在上述浓度下均确能引起细胞凋亡，电泳结果中呈现出典型的梯状条带，在电镜中能清楚地观察到细胞空泡化、染色质固缩和凋亡小体等凋亡细胞的理化特征。本文还进一步探讨了这两种药物凋亡诱导途径，通过观察加药后HCEP细胞线粒体膜电位变化，以及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶caspase-2，-3，-9的变化情况，，结果显示，此两种药物处理后的HCEP细胞线粒体膜电位均发生了下降，线粒体均产生了应激反应，而起始者caspase-2，-9在一定时间内浓度增加到最大值并最终激活了执行者caspase-3，进一步引起了细胞凋亡。从而，推测出这两种药物极有可能通过线粒体途径诱发了凋亡作用。本文以自主建立的非转染、无致瘤性的HCEP细胞系为研究体系，进行了眼表麻醉剂盐酸奥布卡因和喹诺酮类抗菌药氧氟沙星对HCEP细胞凋亡诱导作用的研究，证明了这两种药物分别在0.5~4g/L和1.5~3g/L的浓度范围内能引起HCEP细胞的凋亡诱导作用，具有浓度和时间依赖性，并且极有可能是通过线粒体途径而诱导凋亡。同时验证了体外培养的HCEP细胞可以作为评价眼科药物毒性的有效工具，为眼科药物的临床应用提供理论依据，也为新型眼科药物的开发提供理想的体外研究模型。
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【学位授予单位】：中国海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R96

【参考文献】