cAMP信号通路下调在十溴联苯醚暴露青春期雄性ICR小鼠生殖系统损伤中的作用

发布时间：2018-04-08 16:32

  本文选题：青春期小鼠　切入点：睾丸　出处：《安徽医科大学》2014年硕士论文

【摘要】：目的探讨十溴联苯醚对青春期雄性ICR小鼠的生殖毒性作用；探讨cAMP信号通路在十溴联苯醚暴露青春期雄性ICR小鼠生殖功能损伤中的作用；为建立十溴联苯醚的生殖毒性机制的体外研究提供依据。 方法取健康4周龄雄性ICR小鼠48只，适应性饲养3天后，随机分为6组。小鼠自由进食、饮水，饲养环境温度20-25℃、湿度50%±10%，12h白昼/12h夜晚。隔日染毒1次，连续染毒7周，染毒结束后脱颈椎处死动物，冰浴下分离脏器、称重，保存于-80℃冰箱。称量小鼠体重、睾丸重、附睾重，进行精子计数；睾丸组织进行HE染色；ELISA法检测血清中cAMP含量；放射免疫法检测小鼠血清中睾酮水平；Western Blot检测小鼠睾丸组织中bax、bcl-2和CX-43蛋白表达水平。 结果十溴联苯醚暴露7周后，小鼠睾丸形态、大小发生变化。十溴联苯醚组随染毒剂量增加，睾丸重量下降，附睾重量下降，十溴联苯醚组与NS组相比，睾丸重、附睾重差异有统计学意义。十溴联苯醚暴露使小鼠睾丸、附睾重量减轻，睾丸脏器系数（NS组(0.928±0.152)；DMSO(0.827±0.056)；100mg/kg BW（0.794±0.037）；200mg/kg BW（0.747±0.061）；300mg/kg BW（0.760±0.122）；500mg/kg BW（0.705±0.105））、附睾脏器系数（NS组(0.226±0.036)；DMSO(0.189±0.016)；100mg/kg BW（0.159±0.025）；200mg/kg BW（0.124±0.046）；300mg/kg BW（0.129±0.050）；500mg/kg BW（0.119±0.040））下降。十溴联苯醚影响青春期雄性ICR小鼠精子数目，与对照组（NS（）165.3±7.4）相比十溴联苯醚暴露组（100mg/kgBW：144.7±8.0；200mg/kg BW：93.9±7.1；300mg/kg BW:40.4±8.3；500mg/kgBW:25.6±5.6）（P0.05.）差异有统计学意义，且随着染毒剂量的升高，各十溴联苯醚组小鼠精子数目下降。本研究采用HE染色法初步检测睾丸细胞生长发育情况，由HE染色切片可见十溴联苯醚对小鼠睾丸生殖细胞、间质细胞及支持细胞均有不同程度的损伤，对照组精子数目较多，生殖细胞排列紧密规则，细胞质染色较深，胞核明显；睾丸间质细胞排列紧密，形态完整，染色较深；睾丸支持细胞均匀分布于曲细精管周围，排列紧密，染色较深。十溴联苯醚暴露使小鼠血清cAMP水平明显降低，且随剂量升高小鼠cAMP水平降低，具有剂量效应关系，十溴联苯醚暴露组中，100mg/kg BW（2.142±0.387nmol/L），200mg/kg BW（1.892±0.299nmol/L），300mg/kg BW（1.725±0.260nmol/L），500mg/kg BW（1.702±0.331nmol/L），小鼠血清cAMP含量呈逐渐下降趋势，与对照NS组（2.900±0.301nmol/L）相比， P0.05，，差异有统计学意义。十溴联苯醚暴露与小鼠血清睾酮水平存在剂量效应关系，且随着十溴联苯醚暴露剂量升高血清睾酮含量降低，各组小鼠血清中睾酮浓度（ng/ml）为：NS:0.966±0.052，DMSO:0.705±0.108，100mg/kg BW:0.309±0.048，200mg/kg BW:0.173±0.086，300mg/kg BW:0.154±0.082，500mg/kg BW:0.103±0.039。与对照组相比，十溴联苯醚暴露组P小于0.05，差异有统计学意义。十溴联苯醚暴露引起小鼠睾丸蛋白Bcl-2下表达下降，Bax表达上升，Bax/Bcl-2比值升高，说明小鼠睾丸组织中细胞凋亡水平升高。十溴联苯醚暴露引起小鼠睾丸蛋白CX-43表达降低，说明小鼠睾丸组织中血睾屏障缝隙连接被破坏。 结论十溴联苯醚对青春期雄性ICR小鼠具有生殖毒性，能够引起小鼠睾丸组织中细胞凋亡水平的升高和血睾屏障缝隙连接蛋白的破坏，并存在剂量效应关系；cAMP信号通路可能通过影响睾酮的合成与分泌在BDE-209的生殖毒性中发挥关键作用。
[Abstract]:Objective to explore the reproductive toxicity of ten PBDEs on pubertal male ICR mice; to investigate the signaling pathway of cAMP exposed adolescent male ICR mice reproductive function injury in ten PBDEs; provide the basis for establishing the mechanism of in vitro study on reproductive toxicity of ten polybrominated diphenyl ethers.
Methods 4 week old male ICR 48 mice, adaptive feeding for 3 days were randomly divided into 6 groups. The mice free eating, drinking, feeding environment 20-25 degrees Celsius temperature, humidity of 50% + 10%, 12h day /12h night. The next day at the 1 time, after 7 weeks after the end of the exposure, animals were sacrificed by cervical dislocation. The ice bath under the separation of organs, weighing, stored in the -80 C refrigerator. Weighing mice body weight, testis weight, epididymis weight, sperm count; testis tissue by HE staining; the content of cAMP in serum were measured by ELISA; the testosterone level in serum was determined by radioimmunoassay; mouse testis Western Blot detection of Bax, Bcl-2 and the expression of CX-43 protein.
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本文编号：1722419