脊髓缝隙连接蛋白-30在大鼠吗啡耐受形成中的作用

发布时间：2018-05-02 05:25

  本文选题：缝隙连接蛋白 + CX-30　； 参考：《第二军医大学》2015年硕士论文

【摘要】：目的观察鞘内注射针对脊髓缝隙连接蛋白-30(CX-30)的小干扰RNA(siRNA)对正常大鼠吗啡耐受形成的影响及相关的分子机制。方法选取48只雄性Sprague Dawley大鼠,体重区间180-220 g,随机分成4组(n=12):空白对照组(Ⅰ组)、吗啡耐受组(Ⅱ组)、错配si RNA对照组(Ⅲ组)、CX-30 si RNA处理组(Ⅳ组),所有大鼠鞘内置管,恢复后鞘内注射利多卡因确定导管位置并记为第0天。第1天8:00-10:00,在安静的室内环境下检测四组大鼠的热刺激缩足反应基础潜伏期(PWTL)记为P1,随后背部皮下注射吗啡5 mg/kg,30 min后再次检测PWTL,并记为P2,计算吗啡30 min的最大可能镇痛效应百分比%MPE。第2-8天8:30,Ⅰ、Ⅱ组鞘内注射DPEC溶剂15μl,Ⅲ组鞘内注射错配si RNA 15μl,Ⅳ组鞘内注射CX-30si RNA 15μl;9:00及17:00Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组背部皮下注射吗啡10 mg/kg,Ⅰ组注射等量生理盐水。第9天行为学测试计算%MPE,方法同第1天。随后处死大鼠取L4-L6段脊髓采用Western blot法检测CX-30、ERK及p-ERK蛋白的表达,免疫荧光染色检测脊髓背根神经节及背角GFAP的表达。结果第9天,四组大鼠P1值无显著统计学差异(P0.05);但其余三组与Ⅰ组大鼠比较,P2值及%MPE值显著降低(P0.05);其中Ⅲ组与Ⅱ组大鼠比较,P2值及%MPE值无显著统计学差异(P0.05);而Ⅳ组与Ⅱ组大鼠比较,P2值及%MPE值显著升高(P0.05)。2.免疫印迹结果显示:四组大鼠脊髓内总ERK表达量无显著统计学差异(P0.05);但其余三组与Ⅰ组大鼠比较,p-ERK及CX30表达量显著升高(P0.05);其中Ⅲ组与Ⅱ组大鼠比较,p-ERK及CX 30的表达量无显著统计学差异(P0.05);而Ⅳ组与Ⅱ组大鼠比较,p-ERK及CX 30的表达量显著降低(P0.05)。3.免疫荧光结果显示:其余三组与Ⅰ组大鼠比较,脊髓内GFAP表达量较高(P0.05);其中Ⅱ组与Ⅲ组大鼠GFAP表达最多,比较无显著统计学差异(P0.05);而Ⅳ组与Ⅱ组大鼠比较,GFAP表达量较少(P0.05)。结论鞘内注射针对脊髓CX-30的siRNA可以部分缓解正常大鼠吗啡耐受的形成,其机制可能与抑制脊髓背根神经节及背角星形胶质细胞之间CX30的表达,ERK磷酸化的下调,抑制星形胶质细胞的激活有关。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of intrathecal injection of small interference RNA-siRNAs targeting gap junction protein-30 (CX-30) on morphine tolerance in normal rats and its molecular mechanism. Methods Forty eight male Sprague Dawley rats were randomly divided into 4 groups: blank control group (group 鈪，

本文编号：1832534