CP-25联合5-氟尿嘧啶抗肝细胞癌的作用

发布时间：2018-05-30 04:12

  本文选题：CP-25 + 5-FU　； 参考：《安徽医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：肝癌是最常见的恶性肿瘤之一。国际癌症研究机构(IARC)流行性评估报告GLOBOCAN 2012(Estimated Cancer Incidence,Mortality and Prevalence Worldwide in 2012)显示,肝癌发生率在癌症中排第六位,死亡率排第二位,且男性发病率明显高于女性。肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是肝癌的最主要类型,其具有转移性强,恶性程度高,预后较差等特点。HCC的治疗手段较多(包括手术、放疗、化疗、肝脏移植等),其中手术是HCC治疗的最重要手段。但由于HCC发病隐匿,多数患者被确诊时即为晚期,错过了最佳的手术时期。化学治疗是当前除手术切除外最主要的HCC治疗手段,然而化疗药物选择性差、易耐药且毒副作用大的缺点,导致其治疗效果不如人意。因此,寻求新的安全有效的抗HCC化疗药物显得尤为重要。CP-25是一种新型活性单体药物-苯磺酰芍药苷(芍药苷-6-氧-苯磺酸酯),是由我们所通过对天然药物白芍中的活性单体芍药苷(Pаe)进行酯化修饰后得到的单体化合物,具有抗炎、免疫调节等多种药理作用。然而CP-25是否具有抗HCC的作用,尚未见文献报道。课题组前期研究发现,CP-25可抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖和肝癌H22细胞移植瘤小鼠的肿瘤生长。由此我们推测,CP-25具有一定的抗HCC作用。但初步实验结果表明,单用CP-25抗HCC作用较弱,可能与临床使用的化疗药物细胞毒性作用不同。5-FU是目前临床最常用的抗消化道肿瘤药物,单用5-氟尿嘧啶对HCC有确定的治疗作用,但毒副作用较大,常见有胃肠道反应、脱发以及骨髓抑制等。目前研究发现,部分抗癌药物进行联合具有协同抗癌作用,主要的毒副作用不重叠,所以具有高效和低毒的特点。通过阅读文献和前期实验推测,我们发现CP-25和5-FU在部分机制上有着相似重合的可能性。因此,本课题在以往研究的基础上,采用体内和体外实验相结合的方法,探究CP-25联合5-FU抗HCC的作用及其部分可能的作用机制。目的:探究CP-25联合5-FU抗HCC的作用及其部分可能的作用机制。方法:1将50只两周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、CP-25组(70 mg·kg-1)、5-FU组(5-FU,20 mg·kg-1)和CP-25+5-FU组(CP-25,70 mg·kg-1;5-FU,20 mg·kg-1),共5组,每组10只。除正常组外,其他各组小鼠一次性腹腔注射DEN溶液20 mg·kg 1,正常组小鼠腹腔注射等体积的溶媒。第16 w开始,给药组按CP-25灌胃(1次/d,6次/w)、5-FU腹腔注射(1次/3d,2次/w)方式给予小鼠体内,连续给药8 w,正常组及模型组给予等量的溶媒。第44 w眼球放血处死小鼠,摘取肝脏、脾脏、肺等脏器,称量小鼠各脏器重量,计数肝脏表面肿瘤结节数和体积;HE染色观察肝脏组织病理学变化;赖氏法检测血清中ALT,ALP,AST水平;ELISA法检测血清中AFP水平。Western blot、免疫组化法检测肝脏中P53,Bax,Bcl-2,Caspase-9,Cytochrome c,MMP-2,MMP-9蛋白表达水平。2选取肝癌细胞株HepG2和Bel-7402,分别将CP-25、5-FU、CP-25+5-FU加入HepG2和Bel-7402细胞培养液中,培养24、48 h。CCK-8检测CP-25联合5-FU对HepG2和Bel-7402的生长抑制作用;流式细胞术检测对HepG2和Bel-7402凋亡的影响;划痕实验、Transwell等检测对Bel-7402侵袭、转移能力的影响。Western-blot法检测HepG2和Bel-7402中P53,Bax,Bcl-2,Caspase-9,Cytochrome c以及Bel-7402中MMP-2,MMP-9蛋白表达水平。结果:1.CP-25联合5-FU对DEN诱导HCC小鼠的治疗作用1.1对DEN诱导的HCC小鼠肿瘤结节数和结节体积的影响肝脏图片显示,正常组小鼠肝脏表面圆润、光滑、无结节形成;模型组小鼠肝脏表面粗糙、凹凸不平,有明显的肿瘤结节形成。与模型组相比,CP-25组、5-FU组及CP-25+5-FU组均能明显减少肝脏表面结节数、减小肿瘤结节体积;与单独用药组(CP-25组、5-FU组)相比,CP-25+5-FU组肝脏表面结节数明显减少。1.2对DEN诱导的HCC小鼠肝脏指数、脾指数的影响SPASS分析结果表明,模型组小鼠肝脏、脾指数明显高于正常组。与模型组相比,CP-25、5-FU及CP-25+5-FU均能显著降低DEN诱导的HCC小鼠升高的肝脏、脾脏指数。而CP-25+5-FU组与5-FU组相比,脾脏指数显著降低,肝脏指数无显著性差异。1.3 CP-25联合5-FU显著改善DEN诱导的肝组织病理损伤HE病理图片显示,正常组小鼠肝组织细胞核清晰,肝小叶结构完整,肝细胞索排列整齐;模型组小鼠肝细胞大小、形态各异,肝小叶结构紊乱,形成大量假小叶和炎性细胞浸润;CP-25组、5-FU组及CP-25+5-FU组均可明显改善肝脏损伤,减轻炎性细胞浸润和假小叶形成;而CP-25+5-FU组与CP-25、5-FU单独用药组相比,能明显改善肝脏的病理损伤。1.4 CP-25联合5-FU显著降低DEN诱导升高的血清AST,ALT,ALP,AFP水平模型组小鼠血清中AST,ALP,ALT,AFP水平均明显高于正常组。CP-25组、5-FU组及CP-25+5-FU组小鼠血清ALT,AST,ALP,AFP水平均明显低于模型组。CP-25+5-FU组与CP-25、5-FU单独用药组相比,小鼠血清ALT,AST,ALP,AFP水平明显降低。1.5对DEN诱导HCC小鼠肝组织中P53,Bax,Bcl-2,Cytochrome c,Caspase-9,MMP-2,MMP-9蛋白表达的影响与正常组相比,模型组小鼠肝组织中P53,Bax,Cytochrome c,Caspase-9表达明显降低,Bcl-2,MMP-2,MMP-9表达显著升高。CP-25组、5-FU组、CP-25+5-FU组小鼠肝组织中P53,Bax,Cytochrome c,Caspase-9表达明显高于模型组,而Bcl-2,MMP-2,MMP-9水平明显低于模型组。CP-25+5-FU组升高P53,Bax,Cytochrome c,Caspase-9表达,降低Bcl-2,MMP-2,MMP-9的作用强于CP-25、5-FU单独用药组。2 CP-25联合5-FU对HCC细胞HepG2和Bel-7402的作用2.1对HepG2和Bel-7402生长的影响与未加药组相比,CP-25组、5-FU组及CP-25+5-FU组对均明显抑制HepG2和Bel-7402的存活率,且CP-25+5-FU组细胞存活率低于CP-25、5-FU单独用药组。2.2对HepG2和Bel-7402凋亡的影响FCM检测细胞凋亡率显示,与未加药组相比,CP-25组、5-FU组及CP-25+5-FU组对均明显促进HepG2和Bel-7402凋亡;CP-25+5-FU组处理HepG2,Bel-7402细胞48 h后,其凋亡率明显高于CP-25、5-FU单独用药组。2.3对Bel-7402侵袭、转移能力的影响CP-25联合5-FU作用Bel-7402细胞24 h后,与未加药组相比,CP-25组细胞侵袭、转移能力明显降低,而5-FU组对肝癌细胞侵袭、转移能力有抑制作用,但无显著性差异;与CP-25、5-FU单独用药组相比,CP-25+5-FU组可明显抑制肝癌细胞侵袭、转移的能力。2.4对HepG2和Bel-7402中P53,Bax,Bcl-2,Caspase-9,Cytochrome c,MMP-2和MMP-9蛋白表达的影响。Western blot结果显示,与未加药组相比,CP-25组、5-FU组及CP-25+5-FU组细胞中P53,Bax,Cytochrome c,Caspase-9表达明显升高,Bcl-2,MMP-2,MMP-9表达显著降低。CP-25+5-FU组细胞中Bax,活化的P53,Caspase-9和Cyt c表达明显高于CP-25、5-FU单独用药组,Bcl-2,MMP-2,MMP-9表达显著低于CP-25、5-FU单独用药组。结论:1.CP-25联合5-FU可抑制DEN诱导的小鼠HCC的发生和发展,具有一定的抗HCC作用。2.CP-25联合5-FU可诱导肝癌细胞HepG2,Bel-7402凋亡,抑制Bel-7402的侵袭和转移。3.CP-25联合5-FU可通过激活P53诱导的线粒体凋亡途径诱导肝癌细胞HepG2,Bel-7402凋亡。
[Abstract]:鑲濈檶鏄�鏈�甯歌�佺殑鎭舵�ц偪鐦や箣涓，

本文编号：1953865