琥珀酰明胶注射液减轻cRGD-siRNA所致小鼠肾毒性的实验研究

发布时间：2018-06-26 18:23

本文选题：琥珀酰明胶注射液 + 佳乐施　；参考：《南方医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：研究背景siRNA通过抑制靶mRNA转录而引起特异性基因沉默,它已经成为治疗基因过表达引起的疾病的新型治疗策略。但是,siRNA在临床应用前还遇到了很多障碍,包括靶向性差、细胞摄取率低等,通过将siRNA整合到各种靶向性配体中可解决以上问题。整合素是细胞粘附分子的一种,是连接细胞核与外环境的跨膜受体。其中,整合素α v β 3受体在肿瘤血管中有很高表达,但是在正常内皮细胞中几乎不表达。环状的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(cRGD)是一种整合素配体,可被α vβ 3受体特异性识别。我们利用这一特点,以cRGD为载体,合成介导siRNA聚集在肿瘤的新型肿瘤靶向药物。然而,我们发现cRGD-siRNA分子系统给药会引发肾毒性,必须找到可以有效防治cRGD-siRNA肾毒性的药物。琥珀酰明胶注射液,即佳乐施,是低血容量时的胶体血浆代用品,研究表明,佳乐施可以将RAFT-RGD的重吸收降低50%以上。本实验将佳乐施和cRGD-siRNA经过尾静脉混合注射到小鼠体内,进行血液分析、病理切片、TUNEL分析等试验,验证佳乐施对cRGD-siRNA分子导致的肾毒性的减轻作用,为今后cRGD-siRNA的临床治疗扫除障碍、提供支持。方法1.cRGD-siRNA分子的制备和鉴定将环状cRGD肽通过巯基与siRNA分子正义链的5'端共轭连接,得到cRGD-siRNA分子,用HPLC和质谱测定得到的cRGD-siRNA分子的纯度和结构。2.实验动物分组和血清生化指标测定将成年雄性昆明小鼠随机分成以下三组,每组6只:1)cRGD-siRNA组:尾静脉注射cRGD-siRNA(5 nmol);2)cRGD-siRNA和佳乐施混合注射组:尾静脉注射cRGD-siRNA(5 nmol)和佳乐施(4 mg)混合液;3)对照组:尾静脉注射生理盐水(100 μl)。每隔48h给药一次,共5次,最后一次给药两天后,取血分离血清,测定每组血清肌酐和尿素氮的含量。3.组织学观察和TUNEL染色处死小鼠,取出肾脏,进行常规HE染色并观察。切片脱蜡后用蛋白酶k溶液孵育,然后用含有FITC-12-dUTP标记混合物的TdT孵育缓冲液孵育,在DAPI中染色,荧光显微镜下观察并计算TUNEL凋亡指数。结果1.cRGD-siRNA分子的制备和鉴定本课题成功制备了如下siRNA序列:sense strand:5'-(mG)(mA)(mG)AACCUCACAUGGU(mA)(mC)(mA)dTdT-3';antisense strand:5'-(mU)(mG)(mU)ACCAUGUGAGGUU(mC)(mU)(mC)dTdT-3'。HPLC 测定cRGD-siRNA分子的纯度可达81%,质谱测定其分子质量与理论分子质量一致。2.血清生化指标测定cRGD-siRNA组血清尿素氮和肌酐含量比对照组明显升高,而佳乐施共同给药组血清尿素氮和肌酐明显比cRGD-siRNA组低(P0.05)。3.组织学观察和TUNEL染色HE染色结果显示cRGD-siRNA组大量肾小管上皮细胞水肿、坏死,红细胞渗出,部分肾小球萎缩,而佳乐施混合注射组肾损伤明显减轻。TUNEL结果表明,佳乐施混合注射组凋亡细胞较少,cRGD-siRNA组凋亡细胞明显增多,两组的细胞凋亡指数有显著差异(P0.05)。结论成功合成了 cRGD-siRNA分子并证实了佳乐施可明显减轻cRGD-siRNA导致的肾损伤,提示佳乐施在cRGD-siRNA临床应用过程中可能存在潜在的利用价值,具有较好的临床研究前景。
[Abstract]:A new type of tumor targeting drug for the treatment of cRGD - siRNA has been prepared and identified . The results showed that the purity of cRGD - siRNA was higher than that of cRGD - siRNA group ( P0.05 ) .
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R965

【参考文献】