苯环喹溴铵对变应性鼻炎黏液高分泌的作用及机制研究

发布时间：2021-03-08 18:09

目的变应性鼻炎(allergic rhinitis, AR)是耳鼻咽喉-头颈外科的常见病。鼻腔黏液高分泌是AR气道慢性炎症的重要病理生理改变。初步研究表明,苯环喹溴铵(bencycloquidium bromide, BCQB)作为一种新型的选择性M1/M3受体拮抗剂,对AR展示了良好的疗效。本研究拟通过离体和在体两部分实验进一步探讨苯环喹溴铵对AR黏液高分泌的作用效果以及具体的调控机制。方法第一部分离体实验中,通过改良的酶消化法分离细胞和无血清培养法进行了人鼻黏膜上皮细胞的原代培养；给予10-、10-7和10-8mol/L BCQB处理15min后,加入100μmol/L的卡巴可刺激,24h后用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELI SA)方法测定黏蛋白5 AC (mucin 5AC, MUC5AC)的含量。第二部分在体实验中,用卵清白蛋白(ovabumin, OVA)致敏Sprague-Dawley (SD)大鼠建立AR动物模型。给予BCQB治疗后,进行大鼠鼻部症状的评估。收集鼻腔灌洗液用ELISA测定细胞因子(IL-6, IL-13和TNF-α)的蛋白水平和组胺浓度。提取大鼠鼻黏膜总蛋白用Western-blot方法测定黏蛋白MUC5AC, p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase, p38 MAPK),磷酸化p38 MAPK,细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases, ERK)和磷酸化ERK；鼻黏膜胞浆蛋白测定磷酸化核转录因子-κB (nuclear factor kappa B, NF-κB)(p65和p50)；鼻黏膜胞核蛋白测定NF-κB (p65和p50)。用实时定量PCR测定鼻黏膜IL-6、IL-13、TNF-α和MUC5AC的mRNA水平。另外,用甲苯胺蓝染色、苏木精-伊红染色、阿利新蓝-过碘酸雪夫染色和免疫组织化学染色(MUC5AC,磷酸化p38 MAPK,磷酸化ERK,NF-κB p50和NF-κB p65)观察AR大鼠组织病理学的改变。结果BCQB能明显抑制卡巴可诱导的人鼻黏膜上皮细胞黏蛋白MUC5AC的高分泌。在OVA致敏的SD大鼠中,鼻部给予苯环喹溴铵不仅能缓解鼻部的症状：包括鼻漏、鼻痒和喷嚏,而且能够在蛋白水平和mRNA水平抑制代表炎性分泌的黏液蛋白MUC5AC的过表达。苯环喹溴铵抑制了鼻黏膜组胺的释放和肥大细胞的聚集。IL-6、IL-13和TNF-α的蛋白水平和mRNA水平也被BCQB抑制。组织病理学研究表明了苯环喹溴铵缓解OVA导致的嗜酸性粒细胞浸润,鼻黏膜损伤,杯状细胞的增生／化生。另外,BCBQ能显著降低AR大鼠鼻黏膜MAPK (p38 MAPK和ERK)磷酸化总量和磷酸化的比率,抑制NF-κB (p65和p50)核转位和细胞浆的磷酸化。结论BCQB能够缓解AR的黏液高分泌,减少炎性黏蛋白MUC5AC的分泌,此作用可能牵涉到对细胞因子(IL-6、IL-13和TNF-α)、组胺、信号通路MAPK (p38 MAPK和ERK)和NF-κB (p65和p50)的作用。BCQB非神经元型的抑制黏液MUC5AC分泌从而缓解AR慢性炎症的作用,能够为治疗AR新药的开发研制提供新的理论和实验依据。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R965

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中文摘要

英文摘要

前言

第一部分苯环喹溴铵对卡巴可诱导的人鼻黏膜上皮细胞MUC5AC分泌的影响

前言

第一节鼻黏膜上皮细胞的原代培养

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第二节苯环喹溴铵对卡巴可诱导的人鼻黏膜上皮细胞黏蛋白MUC5A分泌的影响

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

小结

第二部分苯环喹溴铵对变应性鼻炎大鼠黏液高分泌的作用及机制研究

前言

第一节苯环喹溴铵对变应性鼻炎大鼠黏液高分泌的作用

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第二节苯环喹溴铵通过MAPK/NF-κB信号转导通路调控变应性鼻炎大鼠黏液高分泌

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

小结

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参考文献

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