全反式维A酸对小鼠胚胎腭间充质细胞成骨分化的抑制作用及其机制

发布时间：2018-11-20 20:07

【摘要】：目的探讨全反式维A酸(atRA)对小鼠胚胎腭间充质细胞(MEPM)成骨分化的影响及其机制。方法分离培养MEPM细胞,在成骨诱导(OM)培养基中分别加入atRA 0.1和1.0μmol·L-1,分别于培养1,3,5,7和9 d用MTT法测定细胞存活率,化学比色法检测碱性磷酸酶(ALP)活性。培养21 d后,Von-Kossa染色观察矿化面积比。培养9 d后,逆转录PCR(RT-PCR)检测成骨相关基因Runx2、骨桥蛋白以及骨形态发生蛋白受体(Bmpr)1b,Bmpr2和Smad5 mRNA的表达水平。结果培养9 d后,与正常对照组相比,OM及OM+atRA 0.1和1.0μmol·L-1组细胞存活率明显降低(P0.05);OM组细胞ALP活性最高,OM+atRA 1.0μmol·L-1组ALP活性明显低于OM组(P0.05)。培养21 d后,Von-Kossa染色结果显示,OM+atRA 1μmol·L-1组矿化结节面积比为(3.56±1.24)%,明显低于OM组(10.33±2.29)%(P0.05)。培养9 d后,OM组的Runx2相对表达各组内最高,OM+atRA 1.0μmol·L-1组与其相比约下调20%(P0.05)。与正常对照组相比,OM组、OM+atRA 0.1和1.0μmol·L-1组骨桥蛋白mRNA表达明显升高(P0.05)。OM组的Bmpr1b mRNA表达水平为正常对照组的1.6倍,OM+atRA 1.0μmol·L-1组的相对表达仅为OM组的33%(P0.05)。OM+atRA 1.0μmol·L-1组Smad5 mRNA的表达水平明显低于OM组(P0.05)。结论atRA能抑制MEPM的成骨分化,其作用机制可能与其下调Bmpr1b影响BMPR信号有关。
[Abstract]:Objective to investigate the effect and mechanism of all-trans retinoic acid (atRA) on (MEPM) osteogenesis of mouse embryonic palate mesenchymal cells. Methods MEPM cells were isolated and cultured. AtRA 0.1 and 1.0 渭 mol L -1 were added to the osteoblast inducing (OM) medium, respectively. The survival rate of the cells was measured by MTT method on the 7th and 9th day of culture. Alkaline phosphatase (ALP) activity was detected by chemical colorimetry. The mineralized area ratio was observed by Von-Kossa staining after 21 days of culture. After culture for 9 days, the expression of osteogenic related gene Runx2, osteopontin and bone morphogenetic protein receptor (Bmpr) 1bmpr2 and Smad5 mRNA were detected by reverse transcription PCR (RT-PCR). Results after 9 days of culture, the survival rate of OM and OM atRA 0.1 and 1.0 渭 mol L-1 groups was significantly lower than that of normal control group (P0.05). The highest ALP activity in OM group was significantly lower than that in OM group (P0.05). After 21 days of culture, Von-Kossa staining showed that the area ratio of mineralized nodules in, OM atRA 1 渭 mol L-1 group was (3.56 卤1.24)%, which was significantly lower than that in OM group (10.33 卤2.29)% (P0.05). After 9 days of culture, the relative expression of Runx2 in OM group was decreased by about 20% (P0.05) compared with the highest, OM atRA 1.0 渭 mol L-1 group. Compared with the normal control group, the expression of osteopontin mRNA in the OM group was significantly higher than that in the, OM atRA 0.1 and 1.0 渭 mol L-1 group (P0.05). The Bmpr1b mRNA expression level in the). OM group was 1.6-fold higher than that in the normal control group. The relative expression of Smad5 mRNA in the OM atRA 1.0 渭 mol L-1 group was only 33% of that in the OM group (P0.05). The Smad5 mRNA expression level in the). OM atRA 1.0 渭 mol L-1 group was significantly lower than that in the OM group (P0.05). Conclusion atRA can inhibit the osteogenic differentiation of MEPM, and its mechanism may be related to the down-regulation of Bmpr1b on BMPR signal.
【作者单位】： 广东医学院附属南山医院口腔科;中山大学附属口腔医院;中山大学口腔医学研究所;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81300862) 深圳市医疗卫生类科研项目(201302202) 深圳市南山区卫生科技项目(2012040)~~
【分类号】：R96

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本文编号：2345872