奥扎格雷钠对兔视网膜缺血再灌注损伤神经细胞凋亡及对Caspase-3及Bcl-2表达的影响

发布时间：2018-12-11 20:02

【摘要】：目的通过升高眼内压法建立兔视网膜缺血再灌注损伤（retinal ischemia-reperfusion injury RIRI）模型，耳缘静脉给予奥扎格雷钠，利用HE染色，免疫组织化学染色检测视网膜Caspase-3及Bcl-2表达的变化以及TUNEL法检测视网膜神经细胞凋亡的表达，探讨奥扎格雷钠对兔视网膜缺血再灌注损伤的保护作用及对Caspase-3及Bcl-2表达的影响，为临床中视网膜缺血性损伤提供理论依据。方法选用健康雄性日本纯种大耳白兔78只，体重2.0～2.5kg，随机分3组：正常组（6只），单纯缺血再灌注组（IR36只），奥扎格雷钠注射治疗组（36只）。后两组又分为6h、12h、24h、48h、72h、120h组（每组6只）。正常组，不做任何处理；IR组通过升压装置提高前房眼压制备缺血再灌注模型，不再给予其他措施；（奥扎格雷钠+IR）治疗组在缺血再灌注损伤后立即耳缘静脉注射奥扎格雷钠，25mg/kg，1次/d。正常组和损伤组注射等剂量的平衡盐溶液。各组分别于再灌注后6h、12h、24h、48h、72h、120h经耳缘静脉注射空气10ml栓塞处死家兔，立即摘取缺血再灌注的眼球。对不同时间段的视网膜组织分别通过HE染色法观察视网膜形态学变化，通过免疫组化法检测凋亡基因Caspase-3、Bcl-2蛋白表达的变化和通过TUNEL法检测神经细胞凋亡的变化，所得结果进行图像分析，将数据采用SPSS17.0统计软件进行分析。结果1HE染色视网膜形态学变化：正常组视网膜组织层次清晰，神经节细胞呈单层密集排列，细胞体积较大。IR组神经节细胞数目较正常组减少，随时间推迟视网膜水肿加剧，各层细胞排列稍疏松，空泡样变，再灌注72h视网膜水肿减轻，节细胞数目减少，120h视网膜水肿消失，但整个视网膜变薄。奥扎格雷钠注射治疗组神经节细胞数减少程度、各层细胞损害程度均较IR组有所减轻。2免疫组织化学染色法检测Caspase-3、Bcl-2蛋白表达的变化：正常组中没有Caspase-3、Bcl-2蛋白阳性细胞，再灌注6h后阳性表达增多，主要位于神经节细胞层；再灌注12h时表达增多；再灌注24h阳性表达至高峰，主要位于神经节细胞层，内核层也有少量表达，外核层未见表达；再灌注48h后阳性表达逐渐下降，主要位于神经节细胞层；再灌注72h时可见少量表达；至再灌注120h视网膜基本无阳性细胞表达。治疗组各观察指标变化趋势基本与损伤组相似。相同时间点治疗组与损伤组比较，Bcl-2表达明显增强（除120h组），Caspase-3表达明显减弱（P＜0.05）。损伤组内与治疗组内不同时间点之间阳性细胞计数差异显著（P＜0.01）。3TUNEL法检测神经细胞凋亡的变化：正常组中没有凋亡细胞的阳性表达，再灌注6h凋亡细胞出现少量表达，12h凋亡细胞阳性表达明显增多；24h凋亡细胞阳性表达达到高峰，主要位于神经节细胞层与内核层；48h凋亡细胞表达开始下降，72h凋亡细胞阳性表达明显减少；120h未见明显表达。治疗组凋亡细胞阳性表达趋势基本同损伤组，但表达量明显减少。损伤组与治疗组间同一时间点比较，12h、24h、48h、72h组凋亡细胞计数结果差异具有显著统计学意义（P均＜0.01），6h、120h组差异具有统计学意义（P均＜0.05）。损伤组内与治疗组内不同时间点之间凋亡细胞计数差异显著（P＜0.01）。结论奥扎格雷钠对视网膜缺血再灌注损伤中对视网膜神经细胞具有明显的保护作用，其可通过下调Caspase-3蛋白及增加Bcl-2蛋白的表达，，从而达到抑制RIRI时视网膜神经细胞的凋亡。
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【学位授予单位】：河北联合大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R965

【参考文献】