PDE4抑制剂FCPR16对脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

发布时间：2019-02-15 00:01

【摘要】：目的:FCPR16是本实验室合成的新型磷酸二酯酶4(PDE4)抑制剂,具有潜在的抗炎作用。本研究利用SH-SY5Y细胞建立氧糖剥夺(OGD)模型,以及建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,探究FCPR16对脑缺血再灌注损伤的作用及可能的潜在机制。方法:1.进行SH-SY5Y细胞培养,利用Na2S204建立OGD模型;采用CCK-8法检测FCPR16对OGD造模后细胞活力的影响;利用流式细胞术、TUNEL染色、线粒体膜电位检测的方法分析FCPR16对OGD造模后细胞凋亡的作用:Western blot法检测FCPR16对相关凋亡蛋白变化的影响;分离提取细胞线粒体蛋白和胞浆蛋白,Western blot法检测FCPR16对线粒体和胞浆中Cyt C蛋白变化的影响;Western blot检测FCPR16对OGD造模后CREB、p-CREB的作用。2.采用线栓法建立MCAO模型;大鼠缺血2 h后,腹腔注射2.5、5、10 mg/kg FCPR16,再灌注24 h,进行神经功能行为评分;TTC染色测定FCPR16对MCAO模型大鼠脑梗死面积的影响;利用HE染色观察脑组织的形态学变化;用ELISA法和Western bolt法分别检测FCPR16对血清和脑组织中炎症因子含量变化的影响;通过免疫荧光和Western bolt的方法检测Iba-1和GFAP的表达情况;TUNEL染色检测FCPR16对MCAO模型大鼠细胞凋亡的作用,Western bolt法检测凋亡相关蛋白的变化情况;用ELISA法检测脑组织中cAMP的含量,Western bolt法检测FCPR16对CREB、p-CREB表达变化的影响。结果:第一部分实验结果发现:1.利用10mmol/LNa2S2O4和无糖培养基处理SH-SY5Y细胞4 h,再培养24 h,建立OGD模型。5 μM、10 μM和20 μM FCPR16能呈浓度依赖性地提高OGD造模后细胞的存活率。2.流式细胞术、TUNEL染色结果表明,5μM、10μM和20μMFCPR16能够在不同程度上减少OGD造模后细胞的凋亡。3.线粒体膜电位检测发现FCPR16能够减弱OGD造模后线粒体膜电位的下降。Western bolt结果发现FCPR16减少OGD造模后细胞中Caspase-3的含量,增加Bcl-2/Bax的比值和磷酸化Akt蛋白水平,以及减少细胞线粒体的Cyt C向胞浆中的释放。4.FCPR16能够增加OGD造模后CREB磷酸化水平。第二部分实验结果发现:1.2.5,5,10 mg/kg FCPR16能不同程度地改善MCAO大鼠的神经功能症状,减少脑梗死面积。HE染色结果表明FCPR16能改善MCAO模型大鼠脑组织的病理性变化和减轻水肿。2.MCAO造模后大鼠血清和缺血脑组织中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的含量显著增加,2.5,5,10mg/kg FCPR16能剂量依赖性的降低这些炎症因子的增加。3.免疫荧光和Western bolt结果表明FCPR16减弱了大鼠缺血脑组织中GFAP和Iba-1的表达水平。4.FCPR16减少MCAO大鼠的神经细胞凋亡,减少脑组织中Caspase-3的含量,增加Bcl-2/Bax,以及增加磷酸化Akt表达水平。5.FCPR16增加MCAO大鼠脑组织中cAMP的含量,增加磷酸化CREB的表达水平。结论:1.PDE4抑制剂FCPR16能提高OGD造模后SH-SY5Y细胞的存活率,改善由线粒体途径介导的细胞凋亡,其作用可能与激活CREB通路有关。2.FCPR16能改善MCAO大鼠的神经功能症状,减少脑梗死面积,改善脑组织病理性变化。其机制可能与减少炎症因子含量,抑制小胶质细胞和星形胶质细胞的激活,减少神经细胞的凋亡,激活cAMP/CREB路通有关。
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【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R965

【参考文献】