泽泻醇B23-乙酸酯的肝保护作用及其药理学机制

发布时间：2019-02-18 08:32

【摘要】：目的:研究泽泻醇B 23-乙酸酯(alisol B 23-acetate,AB23A)的肝保护作用及其分子药理学机制。方法:(1)泽泻醇B 23-乙酸酯通过激活法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)促进小鼠部分肝切除后的肝再生作用。灌胃给予小鼠AB23A(12,5,25和50mg/kg)每日1次,连续7天。在第4、5、6、7天,行70%肝部分切除术或假手术。以肝脏比重、肝细胞增殖比率及有丝分裂指数评价AB23A促肝再生作用;测定细胞周期蛋白Cyclin D1,Cyclin B1及其上游叉头转录因子M1b(forkhead box M1b,FoxM1b)的基因和蛋白表达,揭示AB23A促肝细胞增殖作用机制;以血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及肝内胆汁酸水平评价AB23A肝保护作用;测定胆汁酸合成限速酶Cyp7a1和胆汁酸外排转运体Bsep表达变化,揭示AB23A降低肝内胆汁酸水平的作用机制;采用FXR拮抗剂木苦甾酮(guggulsterone,GS)阻断FXR信号通路,评价AB23A的体内促肝再生及肝保护作用是否与激活FXR有关;体外实验采用小鼠原代肝细胞培养,测定AB23A对FXR靶基因的诱导作用,并采用基因沉默实验测定FXR基因沉默对AB23A诱导FXR靶基因作用的影响;采用双荧光素酶报告基因实验评价AB23A对FXR的激活作用,以分子对接实验模拟AB23A与FXR的结合作用。(2)泽泻醇B 23-乙酸酯通过调控FXR介导的胆汁酸转运体和合成酶对ANIT所致小鼠肝损伤及胆汁淤积的保护作用。灌胃给予小鼠AB23A(10,20和40 mg/kg)每日1次,连续7天。在第5、6天给药4小时后,灌胃给予ANIT(75 mg/kg)。以血清alt、ast、碱性磷酸酶(alp),γ-谷氨酰转肽酶(γ-gtp),总胆红素,总胆汁酸、肝内总胆汁酸、胆汁中总胆汁酸水平及肝组织病理学评价ab23a对anit所致肝损伤及胆汁淤积的保护作用;测定胆汁酸摄取转运体ntcp、oatp1b2及外排转运体bsep、mrp2、mdr2、mrp3、mrp4表达,揭示ab23a对肝内胆汁酸转运的作用机制;测定胆汁酸合成酶cyp7a1、cyp8b1、cyp27a1及胆汁酸结合酶bal、baat表达,揭示ab23a对胆汁酸合成及结合的作用机制;测定胆汁酸代谢酶cyp3a11、cyp2b10、sult2a1及ugt1a1表达,揭示ab23a对胆汁酸代谢的作用机制;采用fxr拮抗剂gs阻断fxr信号通路,评价ab23a降低肝内胆汁酸及肝保护作用是否与激活fxr有关;双荧光素酶报告基因实验体外评价ab23a对fxr的激活作用。(3)泽泻醇b23-乙酸酯通过激活fxr和stat3对四氯化碳所致小鼠肝毒性的保护作用。以fxr激动剂cdca为阳性对照药,灌胃给予小鼠ab23a(10,20和40mg/kg)每日1次,连续7天。在第5、6天给药4小时后,腹腔注射给予ccl4(750μl/kg)。以血清alt、ast、总胆汁酸、肝组织病理学及tunel细胞凋亡分析,评价ab23a对ccl4所致小鼠肝毒性的保护作用;以brdu染色阳性肝细胞数及有丝分裂指数评价ab23a对肝细胞增殖的影响;测定foxm1b、cyclind1及cyclinb1表达,揭示ab23a促肝细胞增殖的作用机制;测定胆汁酸转运体ntcp、bsep、mrp2及胆汁酸合成酶cyp7a1、cyp8b1表达,揭示ab23a降低肝内胆汁酸水平的作用机制;测定p-stat3及stat3靶基因bcl-xl、socs3表达,揭示ab23a减少凋亡肝细胞的作用机制。(4)泽泻醇b23-乙酸酯作用于fxr介导的转运体和酶对雌激素诱导小鼠胆汁淤积性肝损伤的保护作用。以fxr激动剂cdca为阳性对照药,灌胃给予小鼠ab23a(7.5,15和30mg/kg)每日1次,连续7天。在第3天给药4小时后,皮下注射给予10mg/kg的17α-炔雌醇(ee),每日1次,至第7天。以血清alp、总胆汁酸、胆汁流、胆汁中胆汁酸水平及肝组织病理学评价ab23a对ee诱导胆汁淤积性肝损伤的保护作用;测定肝内胆汁酸外排转运体bsep、mrp2及摄取转运体ntcp表达,揭示ab23a对胆汁酸转运的作用机制;测定胆汁酸合成酶cyp7a1、cyp8b1及上游转录因子shp、fgf15表达,揭示ab23a对胆汁酸合成的作用机制;测定胆汁酸代谢酶cyp3a11、cyp2b10、sult2a1及ugt1a1表达,揭示ab23a对胆汁酸代谢的作用机制;采用fxr拮抗剂gs阻断fxr信号通路,评价ab23a肝保护作用是否与激活fxr有关。结果:(1)在小鼠部分肝切除实验中,ab23a通过上调肝细胞增殖相关蛋白foxm1b,cyclind1和cyclinb1表达,剂量依赖性地促进了小鼠肝细胞增殖;ab23a通过抑制胆汁酸合成限速酶cyp7a1,诱导胆汁酸外排转运体bsep表达,降低了肝内胆汁酸水平、发挥出肝保护作用;ab23a对上述基因表达的影响、促肝再生及肝保护作用被fxr拮抗剂gs所阻断;体外实验表明ab23a对fxr靶基因的调控作用被fxr基因沉默所逆转;双荧光素酶报告基因实验和分子对接实验进一步证实了ab23a对fxr的激活作用。(2)在抗anit所致小鼠肝损伤及胆汁淤积实验中,ab23a通过下调胆汁酸摄取转运体ntcp,上调外排转运体bsep、mrp2及mdr2表达,减少了肝脏对胆汁酸的摄取,增加了肝脏对胆汁酸的外排;通过抑制胆汁酸合成酶cyp7a1和cyp8b1的表达,降低了肝内胆汁酸的合成,通过增加胆汁酸结合酶bal和baat的表达,增加了肝内胆汁酸的结合;通过诱导ii相代谢酶sult2a1的表达,增加了肝内胆汁酸的代谢。进一步通过体内和体外实验方法证实ab23a对anit所致肝损伤和肝内胆汁淤积的肝保护作用是由于fxr介导的上述基因表达的调控。(3)在抗ccl4所致肝毒性实验中,ab23a通过调节参与肝细胞dna复制及有丝分裂的重要基因foxm1b、cyclind1及cyclinb1的表达,促进了肝细胞的增殖;通过下调肝内胆汁酸摄取转运体ntcp和合成酶cyp7a1、cyp8b1的表达,上调胆汁酸外排转运体bsep、mrp2的表达,降低了肝内胆汁酸水平;此两方面的作用与ab23a激活核受体fxr直接相关;通过诱导p-stat3及stat3靶基因bcl-xl、socs3表达,减少了肝细胞的凋亡。(4)在雌激素诱导胆汁淤积性肝损伤实验中,ab23a通过上调外排转运体bsep和mrp2,下调肝脏胆汁酸摄取转运体ntcp的表达,增加了肝脏对胆汁酸的外排,减少了肝脏对胆汁酸的摄取;通过抑制胆汁酸合成酶cyp7a1和cyp8b1的表达,降低了肝内胆汁酸的合成;通过诱导ii相代谢酶sult2a1的表达,增加了肝内胆汁酸的代谢。并进一步证实了ab23a对ee所致胆汁淤积性肝损伤的肝保护作用是由于fxr介导的上述基因表达的调控。结论:ab23a通过激活fxr,促进了小鼠部分肝切除后的肝再生;通过调控FXR介导的胆汁酸转运体和合成酶对ANIT所致肝损伤及胆汁淤积具有保护作用;通过激活FXR和STAT3对四氯化碳所致肝小鼠肝毒性发挥保护作用;通过作用于FXR介导的转运体和酶对雌激素诱导胆汁淤积性肝损伤起到保护作用。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96

【相似文献】

相关重要报纸文章 前1条

1 记者 丁辉;独山港区B23号和B24号 多用途码头项目获核准批复[N];嘉兴日报;2011年

相关博士学位论文 前1条

1 孟强;泽泻醇B23-乙酸酯的肝保护作用及其药理学机制[D];大连医科大学;2015年

，

本文编号：2425674