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蜂毒素对人肝癌细胞生长的抑制作用及其机制探讨

发布时间:2019-02-18 21:42
【摘要】:目的研究蜂毒素对人肝癌细胞(Hep G2、SMMC-7721)生长的抑制作用及其机制。方法采用MTT法检测蜂毒素对Hep G2和SMMC-7721细胞增殖的抑制作用,实时定量PCR检测细胞中microRNA-203(mir-203)以及PIK3CA mRNA的表达变化,Western blot法检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(P-AKT)的表达变化,瞬时转染人mir-203 mimics过表达mir-203后应用实时定量PCR和Western blot检测mir-203对PI3K/AKT信号通路的作用。结果与正常组比较,蜂毒素处理组细胞增殖明显受到抑制,并呈浓度依赖性;实时定量PCR结果显示蜂毒素(1、2、4mg/L)可以明显升高mir-203的表达,PIK3CA mRNA的表达无明显改变;Western blot法结果显示蜂毒素(1、2、4 mg/L)可以降低PI3K以及P-AKT蛋白的表达。在Hep G2和SMMC-7721细胞中过表达mir-203后,与正常组及转染阴性对照组比较,PIK3CA mRNA的表达无明显改变但PI3K以及P-AKT的蛋白表达降低。结论蜂毒素能抑制Hep G2和SMMC-7721细胞的增殖,其机制可能是通过上调mir-203的表达,进而在转录后水平靶向抑制PI3K的表达,抑制PI3K/AKT信号通路的活化。
[Abstract]:Objective to study the inhibitory effect of melittin on the growth of human hepatoma cell line (Hep G _ 2 + SMMC-7721) and its mechanism. Methods MTT assay was used to detect the inhibitory effect of melittin on the proliferation of Hep G2 and SMMC-7721 cells. The expression of microRNA-203 (mir-203) and PIK3CA mRNA in Hep G2 and SMMC-7721 cells were detected by real-time quantitative PCR, and phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) was detected by, Western blot method. The expression of phosphorylated protein kinase B (P-AKT) was detected by real-time quantitative PCR and Western blot. The effect of mir-203 on PI3K/AKT signaling pathway was detected by real-time quantitative PCR and Western blot. Results compared with the normal control group, the cell proliferation of the treated group was inhibited in a dose-dependent manner, and the results of real-time quantitative PCR showed that the expression of mir-203 was significantly increased by melittin (1 2 mg / L), but the expression of PIK3CA mRNA was not changed. The results of Western blot assay showed that the expression of PI3K and P-AKT protein was decreased by melittin (1 mg/L). After overexpression of mir-203 in Hep G2 and SMMC-7721 cells, the expression of PIK3CA mRNA did not change, but the expression of PI3K and P-AKT decreased. Conclusion melittin can inhibit the proliferation of Hep G2 and SMMC-7721 cells by up-regulating the expression of mir-203 and then inhibiting the expression of PI3K and the activation of PI3K/AKT signal pathway at post-transcriptional level.
【作者单位】: 安徽医科大学药学院;安徽医科大学肝病研究所安徽省高校产业共性技术研究院;
【基金】:国家自然科学基金(编号:81273526)
【分类号】:R96

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号:2426243

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