Ⅲ型分泌系统抑制剂的筛

发布时间：2019-04-26 07:57

【摘要】：致病菌对人类社会生活造成的困扰不容忽视,在对抗致病菌的过程中,抗菌药物发挥了重大的作用,但同时也带来了困扰。在医院及各个社区抗菌药物的滥用现象很普遍,由此导致的耐药菌株对人类公共卫生安全造成了很大的威胁。细菌受到的强烈生存压力是耐药菌株产生的主要原因,故寻求既可以降低致病性又对病原体生长不影响的新型抗菌药物迫在眉睫。Ⅲ型分泌系统(T3SS)是存在于革兰氏阴性致病菌中高度保守的毒力因子,是一种注射器状的毒性蛋白运输系统,分泌效应蛋白到宿主细胞促进侵袭。本论文选用具有感染致病性的鼠伤寒沙门氏菌菌株,进行T3SS的具体探讨。首先对提取分离的20个异戊烯基取代化合物采用SDS-PAGE进行初步的筛选,并对有抑制作用的化合物进行复筛确认及Western Blotting验证,并对其构效关系进行简单的探讨,未发现显著的共同结构特征。其中,作用最强的是Licoflavonol(LCF),对毒性蛋白SipA、SipB、SipC和SipD均有明显的抑制作用,且对鞭毛蛋白FliC几乎没有影响。同时,LCF对T3SS毒性蛋白的抑制呈现明显的浓度梯度依赖,且对沙门氏菌的正常生长几乎没有影响。故选取LCF进行作用机制的深入探讨。随后对LCF作用机制研究,沙门氏菌侵袭HeLa细胞的同时加药检测SipC含量,发现LCF抑制SipC的转运;通过RT-PCR检验LCF对T3SS相关基因的转录影响,发现LCF通过抑制SicA/InvF基因的转录而抑制SipC毒性蛋白的分泌。另外检测LCF对针尖蛋白的影响,发现LCF对针尖复合物NC中PrgH的组装影响不大。同时,对课题组前期筛选得到的活性较好的抑制剂Csn-B进行合成,以寻找Csn-B与相关蛋白的结合位点。本论文的合成途径为将原料3,5-二甲氧基苯乙酸进行酰化反应,然后脱甲基反应,最后酯化形成目标产物Csn-B。最后,本论文针对鼠伤寒沙门氏菌T3SS中分子伴侣SicA及转录因子InvF基因进行克隆、异源表达与蛋白质的结晶及与小分子化合物的共晶。经过不断的尝试及不同constructs的构建,SicA蛋白得到柱状棱型晶体;而InvF蛋白从最初的包涵体终于可溶。综上,本论文主要进行T3SS抑制剂的筛选,发现新型天然化合物LCF,并对其作用机制进行探索,对于开发新型抗耐药型抗生素具有积极的意义。
[Abstract]:The trouble caused by pathogenic bacteria to human social life can not be ignored. In the process of anti-pathogenic bacteria, antibacterial drugs play an important role, but at the same time, they also bring trouble. The abuse of antibiotics is widespread in hospitals and communities, and the drug-resistant strains pose a great threat to human health and safety. The strong pressure on bacteria to survive is the main cause of drug-resistant strains. Therefore, it is urgent to seek new antimicrobial agents that can reduce pathogenicity without affecting the growth of pathogens. Type 鈪，

本文编号：2465889