二甲双胍抑制血管紧张素Ⅱ诱导的成年大鼠心脏成纤维细胞增殖

发布时间：2019-07-21 13:16

【摘要】：目的观察二甲双胍对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的成年大鼠心脏成纤维细胞(CF)增殖的影响,并探讨其可能机制。方法通过胰酶、胶原酶Ⅱ联合消化法获取成年大鼠CF,AngⅡ(100nmol/L)刺激CF建立细胞增殖模型,并给予不同浓度(10、50及200μmol/L)二甲双胍进行干预。采用噻唑蓝法观察CF的增殖情况,EdU掺入法测定CF的DNA合成能力。免疫印迹法检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、磷酸化内皮型一氧化氮合酶(peNOS)蛋白表达情况,硝酸还原酶法测定CF培养上清一氧化氮(NO)含量。结果AngⅡ刺激48h能够明显促进成年大鼠CF增殖(P0.05),二甲双胍呈浓度依赖性抑制AngⅡ诱导的CF增殖,二甲双胍呈浓度依赖性增加CF内eNOS磷酸化水平和NO含量(P0.05),eNOS抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)能阻断二甲双胍抑制AngⅡ诱导的CF增殖的作用(P0.05)。结论二甲双胍能抑制AngⅡ诱导的成年大鼠CF增殖,与二甲双胍激活CF内eNOS/NO通路有关。
【图文】：

3次。1.8统计学方法所有计量数据以x±s表示，两组间的均值比较采用成组比较的t检验，多组间的均值比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，以P＜0．05为差异有统计学意义。2结果2.1成年大鼠CF的鉴定倒置显微镜下，原代成年大鼠CF呈梭形或多角形，胞质淡而几乎透明，显得很薄，折光性弱;细胞核较大，呈椭圆形，，无自发性搏动。取培养的第1代细胞进行波形蛋白免疫荧光染色，激光共聚焦荧光显微镜下可见CF胞浆呈绿色荧光(波形蛋白阳性)，超过95%的细胞为波形蛋白染色阳性，提示培养获得的CF纯度较高(图1)。2.2二甲双胍对AngⅡ诱导的CF增殖的影响AngⅡ(100nmol/L)刺激细胞48h后CF增殖明显增加(P＜0．05)，而二甲双胍(10、50、200μmol/L)可以呈浓度依赖性抑制AngⅡ诱导的CF增殖(P＜0．05)。AngⅡ(100nmol/L)刺激细胞48h显著增加CF的DNA合成能力(P＜0．05)，而二甲双胍(10、50、200μmol/L)呈浓度依赖性抑制AngⅡ诱导的CF的DNA合成(P＜0．05;图2)。图1．波形蛋白免疫荧光染色鉴定成年大鼠CF(比例尺=50μm)Figure1．ImmunofluorescencestainingofadultratCFwithvimentin图2．二甲双胍抑制AngⅡ诱导的成年大鼠CF增殖(比例尺=100μm)a为P＜0．05，与正常对照组比较;b为P＜0.05，与AngⅡ对照组比较。Figure2．MetformininhibitsAngⅡ-inducedadultratCFproliferationCN43-1262/R中国动脉硬化杂志2015年第23卷第7期665

行波形蛋白免疫荧光染色，激光共聚焦荧光显微镜下可见CF胞浆呈绿色荧光(波形蛋白阳性)，超过95%的细胞为波形蛋白染色阳性，提示培养获得的CF纯度较高(图1)。2.2二甲双胍对AngⅡ诱导的CF增殖的影响AngⅡ(100nmol/L)刺激细胞48h后CF增殖明显增加(P＜0．05)，而二甲双胍(10、50、200μmol/L)可以呈浓度依赖性抑制AngⅡ诱导的CF增殖(P＜0．05)。AngⅡ(100nmol/L)刺激细胞48h显著增加CF的DNA合成能力(P＜0．05)，而二甲双胍(10、50、200μmol/L)呈浓度依赖性抑制AngⅡ诱导的CF的DNA合成(P＜0．05;图2)。图1．波形蛋白免疫荧光染色鉴定成年大鼠CF(比例尺=50μm)Figure1．ImmunofluorescencestainingofadultratCFwithvimentin图2．二甲双胍抑制AngⅡ诱导的成年大鼠CF增殖(比例尺=100μm)a为P＜0．05，与正常对照组比较;b为P＜0.05，与AngⅡ对照组比较。Figure2．MetformininhibitsAngⅡ-inducedadultratCFproliferationCN43-1262/R中国动脉硬化杂志2015年第23卷第7期665
【作者单位】： 南京大学医学院附属鼓楼医院心内科;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81000055;81070195)
【分类号】：R965

【共引文献】

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本文编号：2517202