硫化氢上调ABCA1的表达促进HepG2细胞载脂蛋白形成

发布时间：2019-07-22 16:08

【摘要】：目的探讨硫化氢对HepG2细胞ATP结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白及载脂蛋白形成的影响。方法将硫化氢供体硫氢化钠(NaHS)以不同浓度(25、50、100、200及400μmol/L)处理HepG2细胞24h后,采用MTT法检测NaHS对HepG2细胞细胞存活率的影响;HepG2细胞以100μmol/LNaHS处理4、12及24h,实时定量PCR检测NaHS对HepG2细胞ABCA1及载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白A2(ApoA2)mRNA的影响,Westernblot检测NaHS对ABCA1、ApoA1及ApoA2蛋白的影响。结果 MTT结果显示,除400μmol/L以外,25、50、100及200μmol/LNaHS对HepG2细胞的生长无抑制作用;Westernblot量效结果显示,NaHS呈浓度依赖性地上调ABCA1蛋白的表达;时效结果显示,100μmol/LNaHS作用4、12及24h,均能上调ABCA1表达及促进培养上清ApoA1、ApoA2的分泌,但不具时间依赖性;实时定量PCR结果显示,ABCA1、ApoA1及ApoA2的mRNA均增加,其变化与蛋白表达变化一致。结论硫化氢可以促进HepG2细胞ABCA1表达,进而促进载脂蛋白形成。
【图文】：

T-3';β-actin上游引物5'-GGCTATGCTCTCCCTCACG-3'，下游引物5'-CGCTCGGTCAGGATCTTCAT-3'。定量PCＲ反应条件为:95℃预变性7min，1个循环，95℃10s，60℃30s，40循环，溶解曲线分析:60℃1s，98℃1s，每秒0.2℃。采用2－ΔΔCt法处理数据。1.8统计学处理数据以x±s表示，均数间比较用单因素方差分析，两两比较用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。2结果2.1NaHS对HepG2细胞存活率的影响使用不同剂量的NaHS处理HepG2细胞24h后，除400μmol/LNaHS对HepG2细胞有抑制作用外，其余各剂量对HepG2细胞无抑制作用(图1)。图1．硫氢化钠对HepG2细胞存活率的影响a为P＜0.05，与对照组比较。Figure1．EffectsofNaHSonviabilityofHepG2cells2.2NaHS促进HepG2细胞ABCA1转录和蛋白表达HepG2细胞ABCA1蛋白表达呈浓度依赖性增加(图2)，综合考虑NaHS对HepG2细胞存活率的影响，选择100μmol/LNaHS处理HepG2细胞。100μmol/LNaHS处理HepG2细胞4h、12h及24h，与对照组相比，ABCA1mＲNA和蛋白表达的水平显著上调(P＜0.05;图3和4)。图2．不同浓度硫氢化钠对HepG2细胞ABCA1表达的影响a为P＜0.05，b为P＜0.01，与对照组比较。Figure2．EffectsofNaHSontheexpressionofABCA1indifferentdoseinHepG2cells图3．硫氢化钠处理不同时间对HepG2细胞ABCA1mＲ-NA表达的影响a为P＜0.05，与对照组比较。Figure3．EffectsofNaHSontheexpressionofABCA1mＲ-NAindifferenttimeinHepG2cells2.3NaHS促进HepG2细胞ApoA1、ApoA2mＲNA和蛋白表达与对照组相比，100μmol/LNaHS处理4h、12h和24h后，ApoA1和ApoA2的mＲNA表达显著上CN43-1262/Ｒ中国动脉硬化杂志2015年第23卷第4期327

妗２捎?－ΔΔCt法处理数据。1.8统计学处理数据以x±s表示，均数间比较用单因素方差分析，两两比较用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。2结果2.1NaHS对HepG2细胞存活率的影响使用不同剂量的NaHS处理HepG2细胞24h后，除400μmol/LNaHS对HepG2细胞有抑制作用外，其余各剂量对HepG2细胞无抑制作用(图1)。图1．硫氢化钠对HepG2细胞存活率的影响a为P＜0.05，与对照组比较。Figure1．EffectsofNaHSonviabilityofHepG2cells2.2NaHS促进HepG2细胞ABCA1转录和蛋白表达HepG2细胞ABCA1蛋白表达呈浓度依赖性增加(图2)，综合考虑NaHS对HepG2细胞存活率的影响，选择100μmol/LNaHS处理HepG2细胞。100μmol/LNaHS处理HepG2细胞4h、12h及24h，与对照组相比，ABCA1mＲNA和蛋白表达的水平显著上调(P＜0.05;图3和4)。图2．不同浓度硫氢化钠对HepG2细胞ABCA1表达的影响a为P＜0.05，，b为P＜0.01，与对照组比较。Figure2．EffectsofNaHSontheexpressionofABCA1indifferentdoseinHepG2cells图3．硫氢化钠处理不同时间对HepG2细胞ABCA1mＲ-NA表达的影响a为P＜0.05，与对照组比较。Figure3．EffectsofNaHSontheexpressionofABCA1mＲ-NAindifferenttimeinHepG2cells2.3NaHS促进HepG2细胞ApoA1、ApoA2mＲNA和蛋白表达与对照组相比，100μmol/LNaHS处理4h、12h和24h后，ApoA1和ApoA2的mＲNA表达显著上CN43-1262/Ｒ中国动脉硬化杂志2015年第23卷第4期327
【作者单位】： 中山大学药学院药理与毒理学实验室;复旦大学药学院药理学教研室;
【基金】：国家自然科学基金资助(81173056)
【分类号】：R96

【参考文献】

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