赖氨酸超小纳米粒的制备及胶质瘤细胞荧光成像

发布时间：2019-08-15 18:52

【摘要】：利用N-芴甲氧羰基-L-赖氨酸分子接枝异硫氰基荧光素,合成赖氨酸-荧光素小分子,在反相微乳液中京尼平作为交联剂交联赖氨酸-荧光素分子制备超小纳米粒。所得纳米粒纯化后进行紫外-近红外可见光扫描分析,确定荧光素交联到纳米粒上及未反应小分子被完全洗脱。动态光散射考察所得纳米粒径为(198.33±0.03)nm、透射电子显微镜观察到纳米粒呈球形,平均粒径为39.78nm。荧光光谱表征所得纳米粒与荧光素荧光光谱完全吻合。利用胶质瘤U87细胞进行纳米粒荧光成像,细胞被染色。利用CHO细胞考察纳米粒的毒性,在一定浓度下(小于8mg/mL)纳米粒对细胞无明显毒副作用。
【图文】：

图１Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ分子的合成路线Ｆｉｇ１ＴｈｅｓｔｒａｔｅｇｙｆｏｒｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆＬｙｓ－ＦＩＴＣ图２Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ质谱图Ｆｉｇ２ＭａｓｓｓｐｅｃｔｒｕｍｏｆＬｙｓ－ＦＩＴＣ２．３Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ纳米粒的性质表征紫外分光光度计进行２００～９００ｎｍ全波长扫描，Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ纳米粒最大吸收波长为４９２ｎｍ，无移动，与单体ＦＩＴＣ相同。滤液无特殊吸收峰，说明ＦＩＴＣ被牢牢的共价接枝在纳米粒内，且纳米粒溶液中无游离单体存在（图４（ａ））。在４８８ｎｍ激发下，Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ纳米粒与ＦＩＴＣ单体荧光发射谱相同，但是强度略有下降，，这是由于ＦＩＴＣ荧光不稳定极易发生淬灭，纳米粒制备过程中部分荧光淬灭造成的。表１Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ纳米粒动态光散射粒径Ｔａｂｌｅ１ＰａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅｏｆＬｙｓ－ＦＩＴＣｎａｎｏｍｅａｓｕｒｅｄｂｙｄｙｎａｍｉｃｌａｓｅｒｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ（ＤＬＳ）编号Ｓｉｚｅ／ｎｍＰＤＩ１１９８．２０．２６９２１９７．５０．２４６３１９９．３０．３２１ａｖｅｒａｇｅ１９８．３３±０．７４０．２８±０．０３图３Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ透射电镜（ＴＥＭ）形貌观察粒径分布Ｆｉｇ３ＴＥＭｉｍａｇｅ＆ｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆＬｙｓ－ＦＩＴＣｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ（ｓｃａｌｅｂａｒ＝１００ｎｍ）２．４Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ纳米粒细胞荧光成像成像前Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ单体溶液（１．０ｍｇ／ｍＬ，０．００１８ｍｍｏＬ／ｍＬ）在３６８ｎｍ激发下呈现较强蓝绿色荧光（如图５插图所示），制备成Ｌｙ

Ｃ纳米粒与ＦＩＴＣ单体荧光发射谱相同，但是强度略有下降，这是由于ＦＩＴＣ荧光不稳定极易发生淬灭，纳米粒制备过程中部分荧光淬灭造成的。表１Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ纳米粒动态光散射粒径Ｔａｂｌｅ１ＰａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅｏｆＬｙｓ－ＦＩＴＣｎａｎｏｍｅａｓｕｒｅｄｂｙｄｙｎａｍｉｃｌａｓｅｒｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ（ＤＬＳ）编号Ｓｉｚｅ／ｎｍＰＤＩ１１９８．２０．２６９２１９７．５０．２４６３１９９．３０．３２１ａｖｅｒａｇｅ１９８．３３±０．７４０．２８±０．０３图３Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ透射电镜（ＴＥＭ）形貌观察粒径分布Ｆｉｇ３ＴＥＭｉｍａｇｅ＆ｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆＬｙｓ－ＦＩＴＣｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ（ｓｃａｌｅｂａｒ＝１００ｎｍ）２．４Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ纳米粒细胞荧光成像成像前Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ单体溶液（１．０ｍｇ／ｍＬ，０．００１８ｍｍｏＬ／ｍＬ）在３６８ｎｍ激发下呈现较强蓝绿色荧光（如图５插图所示），制备成Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ纳米粒后，荧光强度略有下降（如图４（ｂ）所示）。Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ纳米粒溶液（２．０ｍｇ／ｍＬ，估算ＦＩＴＣ浓度为０．００２ｍｍｏＬ／ｍＬ）与Ｕ８７细胞共培养后，在４８８ｎｍ激发下，呈黄绿色荧光，且与明场细胞对照，绝大多数细胞均有荧光，细胞轮廓明显（图５）。细胞荧光成像图放大２倍后，可清晰看到细胞贴壁伸展，活性良好。纳米粒子一般是通过粘附在细胞表面或者通过胞吞／胞饮的方式入胞而实现细胞荧光标记成像的［１７］，目前还没有单独以赖氨酸为骨架材料制备纳米粒并用于细胞
【作者单位】： 中国科学院大连化学物理研究所生物技术部;中国科学院大学;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(31271055,31470944) 辽宁省自然科学基金资助项目(2013020177)
【分类号】：R943

【参考文献】

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本文编号：2527164